Číslo smlouvy Partnera: Číslo smlouvy IMTM: Číslo smlouvy FNUSA: Tsm/2021/371/La

Smlouva o spolupráci

uzavřená v souladu s ustanovením§ 1746 odst. 2 zákona č. 89/2012 Sb., občanského zákoník'11, v účim1ém zně1ú

Níže uvedeného dne, měsíce a roku uzavřely smluvní strany:

1. Fakultní nemocnice u sv. Anny v Brně státní příspěvková organizace

rč:

se sídlem: Pekařská 664/53, 656 91 Brno

Ing. Vlastimilem

00159816zastoupená: Xxxxxxxx, ředitelem Odpovědné pracoviště:

/dále jen „FNUSA"/

2. Karvinská hornická nemocnice a.s.

se sídlem: Zakladatelská 975, Nové Město, 735 06 Karviná

IČ: 60793490

Neurologické Oddělení

zastoupená: MUDr. Xxxxxxx Xxxxxxxxx, předsedou představenstva Odpovědné pracoviště:

/dále xxx „Partner"/

3. Univerzita Palackého v Olomouci

se sídlem: Kíižkovského 511/8, 779 00 Olomouc součást: Lékařská fakulta UP

se sídlem: Hněvotínská 976/3, 779 00 Olomouc IČ: 61989592

zastoupená: prof XXXx. Xxxxxxx Xxxxxxxxxx, CSc., děkanem

Odpovědné pracoviště:

/dále jen „JMTM"/

Ústav molekulární a translační medicíny Lékařské fakulty

Smlouvu o s1>olupráci (dále jako „smlouva")

Preambule

Smluvní sh·any spolu uzavírají tuto smlouvu o spolupráci za účelem řešení projektu s názvem

,,Klonální hematopoéza neznámého významu u cévní mozkové příhody" (dále jako „projekt"). Činnost smluvních stran na projektu je popsána dále, přičemž spolupráce mezi smluvnúni stranami bude financována v rámci projektu Molekulární, buněčný a klinický přístup ke zdravému stárnutí -

XXXXX, xxx. č. CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000868 (smlouva č. Tsm/2018/442/Kr) a spolupráce bude probíhat také v rámci Czech Stroke Research Network.

Ná1llň práce za FNUSA:

FNUSA uhradí náklady na přepravu odebraných vzorků a poskytne Prutnerovi přístup do eCRF (ClinData). Dále pak bude FNUSA s Partnerem spolupracovat v rámci Czech Stroke Research Network za podminek stanovených samostatnou smlouvou.

Náplň práce za Partnera:

Partner provede odběr vzorků krve u pacientů dle vstupních a vylučovacích kritérií protokolu (příloha č. 1 smlouvy). Pacient je o odběru vzorků předem informován a podepisuje informovaný souhlas dle návrhu FNUSA a schválení Etické komise Partnera. Odběr vzorků nebude mít žádný vliv na poskytovanou léčebně preventivní péči. Vzorek je pseudonymizován.

Náplň Jlráce IMTM:

IMTM zajistí potřebné zkumavky pro odběr vzorků u Prutnera. IMTM dále provede laboratorín část

projektu, kdy budou odebrru1é vzorky laboratorně zpracovány pomocí specializovaných metod molekulární biologie.

Článek I.

1. Pacienti, kteří budou odpovědným pracovištěm Partnera vyhodnoceni jako vhodní pro účast v projektu, budou infonnováni o cílech projektu ošetřujícím lékařem

V případě souhlasu těchto pacientů s účastí v projektu, zajistí u těchto pacientů ošetřující lékař podepsání infonnovaného souhlasu.

2. Odebraný vzorek krve (dále jen „vzorek") od pacientů, kteří souhlasili se zařazením do projektu, poskytne Partner v souladu s touto smlouvu FNUSA a IMTM k další realizaci projektu.

3. Dodání vzorků Partnera musí být v souladu s povolením Etické komise Prutnera (dále jako „EK Partnera"), přičemž v době podpisu této smlouvy je k dispozici písemný souhlas EK Partnera s projektem a informovanými souhlasy pacientů.

4. Infonnované souhlasy pacientů budou uloženy v archivované zdravotnícké dokwnentaci Paitnera. Partner, zejména prostřednictvím zajistí získání tohoto souhlasu od jednotlivých pacientů k odběru, uchování a použití krve jim odebrané (klinických vzorků) pro účely realizace projektu.

5. Vzorky budou bezprostředně po odebrátú vloženy do sterilních přepravních nádob, nejčastěji zkumavek a neprodleně přepraveny do výzkwnné laboratoře IMTM, kde bude probíhat laboratorní část projektu. Vzorky budou laboratorně zpracovát1y pomocí specializovaných metod molelnůámí biologie.

6. Vzorky budou ze strru1y Xxxxxxxx předávány přepravní společnosti a odeslány do laboratoří IMTM po předchozí domluvě smluvních stran. FNUSA není odpovědná za ztrátu nebo škodu na vzorcích takto dodru1ých. Náklady na přepravu uhradí FNUSA, která také zvolí způsob přepravy a přepravní společnost, tak aby byly dodrženy všechny podmínky protokolu (příloha č. 1 smlouvy).

7. Vzorky budou zpracovány pseudonymizovaně, pod číselným kódem. Prutner nebude FNUSA ani IMTM předávat žádné osobní údaje pacientů, od nichž byly vzorky odebrány, podle kterých by pacienti mohli být přímo identifikováni.

8. Vzorky budou smluvnúni stranruni použity výhradně k provedení tohoto projektu. Pro umožně1ú interní či externí kontroly získaných výsledků (včetně reprodukovatelnosti dat) bude IMTM

vzorky či produkty (materiály) z nich odvozené archivovat po dobu 10 let a poté budou zlikvidovány jako biologický odpad.

9. Smluvní strany se dohodly, že do projektu bude zařazeno maximálně 100-200 pacientů. Smluvní strany se dohodly, že projekt bude probíhat v anticipované době od 1. 1. 2021 do 30.6.2023.

Článek li.

1. Smluvtú strany jsou při realizaci projektu povinny dodržovat příslušné právní předpisy České republiky, zejména zákon č. 89/2012 Sb., občanský zákoník, ve znění pozdějších předpisů, a zákon č. 372/2011 Sb., o zdravotních službách a podmínkách jejich poskytování, ve znění pozdějších předpisů (dále jen „ZZS").

2. Smluvní strany jsou dále povi1my se vzájemně bez odkladu infonnovat o skutečnostech a změnách, které mají nebo mohou mít vliv na uskutečnění projektu či dosažení účelu a cílú projektu a na tuto smlouvu.

Článek III. Ochrana osobních údajů

1. Smluvní strany se zavazují dodržovat všechny pfislušné právní předpisy České republiky včetně předpisů Evropské unie ve vztahu k ocluaně osob1úch údajů. V rámci projektu jsou smluvní strany správci osobních údajů.

2. Každá smluvní strana bude odpovědná za své vlastní zpracování osobních údají1 a zajistí, aby osobní údaje týkající se pacientů byly shromažďovány, uchovávány a předávány v souladu se všemi platnými nadnárodními a národními předpisy o ochraně osobních údajů a touto smlouvou.

3. Smluvní strany se zavazují přijmout taková opatření, aby nemohlo dojít k neoprávněnému nebo nahodilému přístupu k osobním údajům, k jejich změně, zničení či ztrátě, neoprávněným přenosům, k jejich jinému neoprávněnému zpracování, jakož i k jinému zneužití osobních údajů.

4. Data pacientů, respektive subjektů projektu, budou Partnerem v pseudonymizované podobě poskytnuty FNUSA a IMTM v souladu s info1movaným souhlasem pacienta.

5. Partner bude FNUSA a IMTM předávat v pseudonymizované podobě následující info1mace týkající se pacientů:

• vzorek označený kódem pacienta a datem a časem odběru;

• klinická data - váha, výška, BMI, rasa, neurologické skóre, fonna terapie a další klinická data, která se týkají onemocnění cévní mozkovou příhodou.

6. Zpracování osobních údají1 bude probíhat po dobu účinnosti smlouvy. Tím nejsou dotčeny povinnosti smluvních stran jakožto správců osobních údajů uchovávat zpracovávané osobní údaje podle příslušných právních předpisů, zejména zákona č. 372/2011 Sb., o zdravotních službách a podmínkách jejich poskytování, ve znění pozdějších předpisů.

7. Jakmile smluvtú strany pozbydou právní důvody pro zpracování osobních údajů podle platných právních předpisů a této smlouvy, dojde k likvidaci osobních údajů, a to tak, že bude ze strany Pattnera nenávratně zničen klíč k propojení pseudonymizovaných údajů, takže subjekt údajů přestane být identifikovatelným.

8. Vzhledem ke způsobu předávání dat subjektů údajů, tedy v pseudonymizované podobě a nemožnosti jejich identifikace ze strany FNUSA a IMTM, se budou subjekty údajů pro uplatňování svých práv spojenými s ochranou osobních údajů obracet výhradně na Partnera. V pi'-ípadě odvolání souhlasu se zpracováváním osobních údajů ze strany subjektu údajů je Partner

povinen infonnovat o této skutečnosti FNUSA a IMTM bez zbytečného odkladu, respektive jim sdělit kódové označení příslušného vzorku, ke kterému se toto odvolání vztahuje.

9. Smluvní strany se zavazují si navzájem hlásit každé porušení zabezpečení osobních údajů, a to bez zbytečného odkladu potom, co se o takovém porušení dozví, nejpozději do 24 hodin, tak, aby incidentem dotčená strana měla možnost incident posoudit a splnit své povinnosti vůči dozorovému úřadu, případně vůči subjektům údajů.

IO. Smluvní strany se zavazují k vzájemné součinnosti a pomoci při řešení všech podstatných problémů, které mohou v rámci plnění smlouvy vzniknout v souvislosti s ochranou osobních údajů. Tato součinnost zahrnuje i efektivní spolupráci v případě kontroly ze strany dozorového úřadu, vyřizováín žádostí a případných stížností pacientů, a oznamování bezpečnostních incidentů, a případných správních či soudních řízení.

Článek IV. Publikace

1. Partner bude na publikaci výsledku projektu, který bude publikován IMTM spolu s FNUSA, uveden jako spoluautor. Konkrétní osobou uvedenou na publikaci bude

Článek V.

Duševní vlastnictví a důvěrné informace

1. Ačkoliv se nepředpokládá, že některá ze smluvních stran poskytne druhé smluvní straně jakékoliv duševní vlastnictví nebo práva k předmětu duševního vlastnictví, smluvní strany se dohodly, že pokud kterákoliv se smluvních stran poskytne druhé straně pro spolupráci dle této smlouvy nehmotný majetek v podobě předmětů práv duševního vlastnictví v nejširším slova smyslu podle platné a účinné právní úpravy (vynález, užitný vzor, know-how atd.), smluvtú strany uzavřou smlouvu o poskytnutí práva k užívání předmětu duševního vlastnictví, která závazně pro smluvní strany určí práva a povinnosti k poskytnuté licenci, včetně licenční ceny (dále jen „licence"). Určená práva a povinnosti, podmínky a pravidla poskytnutí licence k předmětu duševního vlastnictví nesmí zakládat nedovolenou nepřímou státní podporu.

2. V případě ukončení spolupráce dle této smlouvy po dobu účinnosti licence smluV11í strana přestane užívat duševní vlastnictví poskytnuté na základě licence druhou smluvní stranou a vrátí jí všechny hmotné nosiče, dokumenty a podklady poskytnuté druhou smluvní stranou za účelem užívání daného duševního vlastnictví, není-li výslovně v licenci ujednáno jinak. Smluvní strana zároveň zachová mlčenlivost o všech důvěrných skutečnostech a infonnacích týkajících se nebo souvisejících s duševním vlastnictvím poskytnutým druhou smluvní stranou za účelem spolupráce, které se dověděla v rámci realizace spolupráce dle této smlouvy nebo v souvislosti s ní, v souladu s podmínkami účinné licence.

3. Veškeré podklady, dokumentace, informace a výsledky výzkumu a vývoje, jež si smluvní strany mezi sebou za dobu trvání této smlouvy poskytnou, jsou obchodním tajemstvím či důvěrnou infonnací poskytovatele těchto podkladů a infmmací, ledaže by šlo o podklady, dokumentaci, info1mace a výsledky výzkumu a vývoje, (i) jež jsou nebo se stanou obecně známé, tj. běžné přístupné veřejnosti; nebo (ii) které smluvní strana získala od třetí osoby, a to nikoli v důsledku porušení této smlouvy, jiné smlouvy nebo obecně závazných právních předpisů smluvní stranou či třetí osobou. Smluvní strany se zavazují zacházet důvěrně s veške1ým obchodním tajemstvím či důvěrnými informacemi druhé smluvní strany, ani je nepoužívat pro jiné účely než stanovené v této smlouvě, ledaže k jejich poskytnutí je, nikoliv vlastním zaviněním, smluvní strana zavázána na základě zákona nebo závazného pravomocného rozhodnutí soudu nebo orgánu veřejné správy. Povinnost dle tohoto odstavce bude pro strany závazná i po zániku této smlouvy, a to bez časového omezení, nepřestane-li být infonnace důvěrnou, nebo neuplyne-li doba ochrany předmětu práv.

4. Data získaná v rámci projektu jsou společným majetkem Partnera, FNUSA a IMTM.

Xxxxxx XX. Xxxxxxxxxxx

1. Smluvní strany se dohodly, že spolupráce na základě této smlouvy bude probíhat mezi stranami bezplatně a každá smluvm strana si ponese své náklady. Materiál (zejm. nádoby a roztoky) nezbytný pro provedení odběrů vzorků za tímto účelem poskytne IMTM Partnerovi na své náklady, a to v množství potřebném pro spolupráci smluvních stran na základě této smlouvy a protokolu projektu, kte1ý je přílohou této smlouvy. Náklady na přepravu vzorků budou hrazeny FNUSA.

Článek VU. Závěrečná ustanovení

I. Tato smlouva nabývá platnosti dnem podpisu poslední smluvní strany a uzavírá se na dobu určitou, a to do 30. 6. 2023.

2. Smluvní strany berou na vědomí, že tato smlouva podléhá povinnému uveřejnění podle zákona č. 340/201 5 Sb., o zvláštních podmínkách účinnosti některých smluv, uveřejňování těchto smluv a o registru smluv (zákon o registru smluv), ve znění pozdějších předpisů. Smlouva nabývá účinnosti dnem jejího uveřejnění v registru smluv. Uveřejnění zajisti IMTM a infonnuje o něm ostatní smluvní strany.

3. Každá ze smluvních stran je oprávněna kdykoliv ukončit tuto smlouvu i bez uvedení důvodu písemnou výpovědí doručenou druhé smluvní straně s výpovědní lhůtou, která činí 30 dnů po doručení výpovědi ostatním smluvním stranám. Tuto smlouvu lze také ukončit písemnou dohodou smluvních stran.

4. Změny, jakož i doplňky této smlouvy mohou být činěny pouze písemně a musí být podepsány smluvními stranami.

5. Nebude-li případně některá ze stran trvat na splnění povinnosti druhé smluvní strany ze smlouvy, nebude se to vykládat jako vzdání se jakéhokoliv práva touto smluvní stranou či práva žádat splnění této povinnosti. Žádné vzdání se práv vzniklých v důsledku porušení smlouvy nebude platné a účinné, pokud nebude sepsáno písemně a podepsáno smluvní sh·ai1ou, jež se práv vzdává, a žádné vzdání se práv se nebude vztahovat na práva vzniklá v důsledku následného nebo jakéhokoliv jiného pornše1ú smlouvy.

6. Tato smlouva je vyhotovena ve třech stejnopisech s platností 01iginálu, z nichž každá smluvní strana obdrží po jednom vyhotovení.

7. Pokud se jakékoli ustanovení této smlouvy stane nebo ukáže, obecně či relativně, neplatným nebo neúčinným, nebude tím žádným způsobem dotčena platnost nebo účinnost ostatních ustanovení této smlouvy nebo dotčeného ustanovení nad rámec relativní neplatnosti nebo neúčinnosti.

8. Tato smlouva se r-ídí právními předpisy České republiky. Všechny spo1y, které vzniknou z této smlouvy nebo v souvislosti s ní, a které se nepodaří vyřešit přednostně smírnou cestou, budou rozhodovány obecnými soudy České republiky.

9. Smluvní strany shodně prohlašují, že tato smlouva byla uzavřena na základě jejich pravé, svobodné a vážné vůle, nikoliv v tísni nebo za jinak jednostranně nevýhodných podmínek a podpisem této smlouvy potvrzují, že se dobře seznámily s textem této smlouvy a že se cítí být

jejím obsahem plně vázány. Na důkaz souhlasu s obsahem této smlouvy připojují smluvní strany své vlastnoruční podpisy.

10. Nedílnou součástí této smlouvy je také její piíloha č. 1 - Protokol Studie s názvem Klonální hematopoéza neurčeného potenciálu při ischemické mozkové příhodě.

O 3. 06. 2021

•

V Brne dne ... ... ... . .. ... .

v .J:4J:nfJd. ... dne ... ... ... ... v _q/9/!J?.W.. dne ... J..O.. ��-�- 2021

2 O. 05. 2021

Za FNUSA:

Ing. Vlastimi V ředitel

Za Partnera:

XXXx. Xxxxx Xxxxx předseda představe1 tva

Za IMTM:

p1,of XXXx. Xxxxx Xxxxxxxx,

��

Příloha č. 1 - Protokol

Clona/ hematopoiesis afindeterminate potential in ischemie stroke

Protocol outline Last version: March, 2021

Authors:

ICRC/FNUSA, Brno:

IMTM, Olomouc:

Background

Recently, it was demonstrated that clona! hematopoiesis of indeterminate potential (CHIP) is associated with the risk of coronruy herut disease or early-onset myocardial infru·cti on. Further, causality between CHJP and atherosclerosis was established in atherosclerosis-prone mice that were transplanted with bone marrow from Tet2 knockout and from control mice. As compared with mice that had received control bone marrow, mi.ce that had received bone mru.rnw from the Tet2 knockout mice had a median lesion size in the a01tic root that was twice as l arge after 5 weeks (NEJM 20 17).

Hence, the data imply that somatic mutations in hematopoietic cells may contribute to the development of human atherosclerosis. Of note, hematopoietic cell dones are rare in persons yow1ger than 40 years, but they occur in more than 1 0% in the population above 70 years (NEJM 20 1 4).

TI1e relationship between CHIP and risk of ischemie st:roke has not been expJored in details but is highly clinically relevant for several reasons. First, many patients with stroke do not have clear cause of the stroke or traditional risk factors present. Also, many patients with carotid atherosclerosis never have stroke xxxxxx.xx that atherosclerosis itself may not be enough to produce atherothrombosis and vascular event.

Hypothesis

For this project we propase to study such relationship and explore one or several of the fol lowing hypotheses:

Hypothesis 1 : Clonal hematopoiesis is associated with carotid atherosclerosis generally.

Hypothesis 2: Clonal hematopoiesis is associated with symptomatic carotid atherosclerosis in the Czech population.

Hypothesis 3: Clonal hematopoiesis is associated with ischemie stroke.

Hypothesis 4: Clonal hematopoiesis is more frequent in leucocytes fixed to endothelium affected by carotid atherosclerosis as compared to circulating leucocytes or unaffected endothelium.

Hypothesis 5: Clona! macrophages/monocytes as leucocyte subtype have a maJor role in atherosclerosis build-up. They are more frequently present in the atherosclerotic plague compared to the peripheral blood.

Hypothesis 6: Occurrence of clona! hematopoiesis leads to stroke in patients with pre-existing carotid atherosclerosis.

Objectives and purpose of the study

• To examme the association between clonal hematopoiesis of CHIP type and carotid atherosclerosis.

• To identify new risk factors ofischemie stroke.

• To clarify in more detail to what extent clona! hematopoiesis affects etiopathogenesis of atherosclerosis.

Methods

There are several impo1tant considerations for the study design:

1) Even if CHIP is associated with stroke or is causing stroke, it is not clear how exactly and to what extent. Therefore, several hypotheses are possible that would require different design especially in tetms of definition ofpatient population.

2) Limit of detection for gene panel sequencing of leucocyte subsets and FACS perfonnance are not established and must be tested.

3) Sample size to detect a difference of CHIP between two patients' populations will depend on CHIP frequency in these two groups. Such frequency is unknown and could be only extrapolated from vety limited data - see table I below. Therefore, before conducting properly powered study, more infonnation on expected CHIP frequency in different groups of ischemie stroke patients is needed.

4) It is expected that for properly powered study, sample size of aroW1d 1 000 patients will be needed. Therefore, project must be co-funded with finances from other grant and patient enrollment rate must be sufficient.

Tahle 1 documents frequency of CHIPS in patients with atherosclerosis and controls. Also, it calculates sample size that would be needed to detect such a difference.

Study	Outcome	CHIP positivity	CHIP positivity	Sample s1ze of one
		Atherosclerosis	Atherosclerosis	group needed to
		present	absent	detect the difference
				with Alfa 5%	and
				power 80%
Bioimage	CAD	1 7%	1 0%	37 1
MDC	CAD	7%	4%	903
AVTB	MI early onset	2%	1%	23 16
PROMIS	Ml ea.rly onset	2%	1%	23 16

5) Prevalence of CHIP is low in patients below 70 (see figure I below). Therefore, studying CHIP in patients below 70 would require iucrease of sample size. Excluding patients below 70 will, as a tradeoff, decrease patients' emolment.

o.s

0.4-

?, 0. 3 -

0.2 -

0. 1 -

o.o

�,� -;,-,°' >°' �°' <%> ""°' � �°'°'

<&>

"C ...,<::í -$) '><:;{ 1,o<::í '\t:l' 't,<:í

Age ()'r)

"i t:)"'--:-,

No. with Mutation o 1 50 138 282 219 37 14

317

Total 240 855 2894 5441 5002 2300 86 17

Figure 1. Prevalence of Somatic Mutations, According to Age.

Colored bands, in inc reasingly l ighter shades. represent tne 50th, 75th, and 95th percentiles.

Given the considerations above, we propose to proceed in at least two stages. The first stage will be a set of explorato1y studies, underpowered, with pragmatic sample size (25-50 patients per group), and with the main goal to optimize DNA extraction, sequencing method, and FACS method and to detect signal for difference between two patients groups.

Total number of patients enrolled in the fírst phase would be 100-200. Up to 25 tissue samples wi11 be also analyzed.

ln the second stage, we wi11 run properly powered single center study with aim to detect statistical difference between two patients' groups. Previous exploratory study will help us to focus on patients' groups that will most likely prove the hypothesis. It is estimated based on previous data that around I 000 ofpatients will be needed.

Design of the first exploratory study

One purpose ofthe exploratory study will be to obtain knowledge on the biology mechanisms of CHIP and atherosclerosis. Therefore, tissue samples obtained dming vascular surgeries will be tested for presence of CHIP positive macrophages/monocytes within atherosclerotic plaques.

In line with the second goal, data from four groups of patients will be collected, 25-50 patients per group. Goal is to prioritize hypothesis testing, increase precision of sample size calculation, and estimate/optimize rate of patients' recmitment.

We will enroll patients older than 70 years. Only patients with ischemie strokes in anterior circulation will be included (no transitory ischemie attacks). The patients will be divided into 4 groups and in each group will be enrolled 25-50 patients:

• Patients with a carotid stenosis (symptomatic carotid stenosis :::: 50% according to NASCET criteria) who suffered an ischemie stroke. Etiology - TOAST 1.

• Patients with asymptomatic carotid stenosis :::: 50% according to NASCET criteria.

• Patients with no carotid atherosclerosis or carotid stenosis :S 30% who suffered an ischemie stroke. Etiology - TOAST 2 and 3.

• Patients without ischemie stroke in their medical history and with no carotid atherosclerosis or carotid stenosis :S 30%.

In addition, in the first group we will obtain tissue samples of atherosclerotic plaque and the smTOunding tissue from carotid endruterectomy. The aim is to detennine if in atherosclerotic plaque there is increased presence of CHIP positive leucocytes compared to leucocytes circulating in

peripheral blood. Subsequently, we will test if there is a difference in CHIP in endothelia! cells presented in AS plaque compared to tbe endothelimn unaffected by the atherosclerosis.

Obtaining tbe biological samples and pre-analytical J>hase

For DNA sequence analysis from whole blood samples, I O ml of peripheral blood will be drawn into Cell-Free DNA BCT CE tube (Streck). Before posting, Streck tubes will be stored at a room temperature and send to Olomouc within a week ofblood drawing.

To obtain defined cell population (macrophages/monocytes and/or circulating endothelia! cells, and endothelia! progenitor cells), we will use FACS flow cytometry approach (BD/Xxxxxxx Coulter). 5 ml of peiipheral blood will be drawn into Cyto-Chex BCT tubes (Streck) for irnmune cells. When rare populations of endothelia! cells will be analyzed 1O ml of peripheral blood wili be drawn. Streck tubes will be stored at a room temperature and send to Olomouc within a week ofblood drawing.

For plaque analysis : 5*5*5 mm of endothelial/plaque tissue will be stabilized by placing into 1000 µl of stabilization solution (RNA Jater or Allprotect Tissue Reagent) at a room temperature and send to lab for processing within week. The rest of the tissue will be placed to buffered 4% formaldehyde solution and send for processing to Olomouc.

To detect CHIP related mutations, we will use MPS approach using a panel of frequently mutated genes, defined in literature (Jaiswal 2014, 2017). Illumina MPS platform will be using amplicon based enrichment libraty preparation with unique molecular indices.

All needed inst:ruments are readily available in IMTM. Stabilization reagents,solution and tubes for blood will be provided by UMTM

Outcome measures

FACS - fraction ofblood elements.

MPS - presence of known variants with association to atherosclerosis, or known causal variants in a defined (sub)set of cells.

Ethical considerations:

Patient samples, after consenting to the processing of biological material, will be handled in accordance with Regulation 201 6/679 of the European Pru·liament and ofthe Council (EU) of27 Apríl 2016 on the protection of individuals with regru·d to the processing of personal data and on the free movement of such data and cancelling the Directive 95/46 / EC (General Data Protection Regulation; hereinafter referred to as 'GDPR') and in accordance with the relevant national rules on persona! data

1 1

protection. The medical facility will keep the medical documentation according to the legal regulations (Act No. 372/20 1 1 Coll., On health services and conditions of their provision, Regulation No. 98/2012 Coll., On medical documentation, etc.), and the processing of personal data in health services. For the purpose of processing personal data in the field of science and research, it is govemed by the relevant legal regulations (Act No. 378/2007 Coll., On Phannaceuticals and on Amendments to Ce1tain Related Acts, Regulation No. 226/2008 Coll., On Good Clinical Practice and Closer Conditions of Clinical evaluation of medicinal products). Inf01med consent by the trial subject, either a patient or a volunteer involved in a particular research study will be obtained and the processing ofpersonal data associated with this research will prirnarily be based on his consent. Informed consent is signed by the subject (its legal representative) during enrolling the patient into study. The infonned consent includes, in addition to personal data, the intended purpose of the resaerch and its possible risks and the impact on the health of the person. Further treatment of biological material after its use in the study is described as well.

Data analysis

Percentual distribution ofpatticular blood elements using FACS.

P1imary and secondary analysis of MPS data, with list of frequencies of detected variants associated with CHIP.

Study fmancing

Research project is funded from grant resources - ENOCH

Attachments:

lnfonned consent

References

1. Gibson CJ, Xxxxxxxx DP: New Insights :from Studies of Clonal Hematopoiesis. Clin Cancer Res

2018, 24:4633-4642.

2. Xx F, Xx X, Xxxx Q, Xxx DW: Clonal hematopoiesis of indetenninate potential (CHIP): A potential conttibutor to atherlosclerotic cardio/cerebro-vascular diseases? Genes & Diseases 20 I 8, 5 :75 76.

3. Xxxxxxx S, Natat·ajan P, Xxxxxx AJ, Gibson CJ, Xxxx AG, Xxxxxxx E, XxXxxxxx M, Xxxxx N, Xxx0xxx S, Xxxxxxxxx D, Xxxxx U, Xxxxxx R, Xxxxxx V, Xxxxxx J, Xxxxxxxx P, Xxxxxxxx D, Xxxxxxxx O, Xxxxxxx GK, Neuberg D, Xxxxx P, Xxxxxxxxxx S, Ebe1t BL: Clona! Hematopoiesis and Risk of Atherosclerotic Cardiovascular Disease. New England Journal ofMedicine 201 7, 377: 1 1 1-121.

4. Fuster JJ, MacLauchlan S, Zuriaga MA, Polackal MN, Ostriker AC, Chakraborty R, Wu C-L, Xxxx S, Xxxxxxxxxxxx S, Xxxx C, Xxxxx J, Xxxxx X, Xxxxxxxxxx V, Xxxxxxxxx AAB, Xxxxxx MA, Xxxxxx X, Xxxxxxx K.K, Xxxxxx KA, Xxxxx K: Clonal hematopoiesis associated with TET2 defíciency accelerates atherosclerosis development in mice. Science 2017, 355:842-847.

5. Xxxxxxx S, Xxxxxxxxxxx P, Xxxxxxxx J, Xxxxxxx A, Xxxxxxx PV, Xxx BG, Xxxxxxxx RC, Me1mel CH, Xxxx N, Xxxxxx A, Xxxxxxx JM, Xxxxxxxxxx V, Xxx FC, Xxxx MJ, Xxxxxxxxx B, Xxxxxxxx L, Xxxxxxxxx HA, Xxxxxxxxx C, Xxxx G, Xxxxxx A, Xxxxxxx BF, Xxxxxxx S, Xxxxxxxxxx S, Xxxxxxxxx HM, XxXxxxxx MI, Xxxxxxx M, Xxxxxxxxxx J, Xxxxxx C, Groop L, Xxxxxx G, et al.: Age-Related Clonal Hematopoiesis Associated with Adverse Outcomes. New England Journal of Medicine 2014, 371 :2488-2498.

6. Xxxx UN, Kl1ot MB, Bajzer CT, Sapp SK, Xxxxx EM, Xxxxxx SJ, E!Jis SG, Lincoff AM, Topol EJ: Prevalence of conventional risk factors in patients with coronary heart disease. Jama 2003, 290:898- 904.

Document Metadata

Table of Contents

Číslo smlouvy Partnera: Číslo smlouvy IMTM: Číslo smlouvy FNUSA: Tsm/2021/371/La

Document Metadata