ZMLUVA O POSKYTNUTÍ DOTÁCIE Z ROZPOČTOVEJ KAPITOLY MINISTERSTVA ZDRAVOTNÍCTVA SLOVENSKEJ REPUBLIKY

ZMLUVA O POSKYTNUTÍ DOTÁCIE Z ROZPOČTOVEJ KAPITOLY MINISTERSTVA ZDRAVOTNÍCTVA SLOVENSKEJ REPUBLIKY

č. 308/2018

uzatvorená v zmysle § 2 ods. 1 písm. a) v spojení s § 5 ods. 4 zákona č. 525/2010 Z. z.

o poskytovaní dotácií v pôsobnosti Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky v znení neskorších predpisov a § 51 zákona č. 40/1964 Zb. Občianskeho zákonníka (ďalej len „zmluva“)

Článok I Zmluvné strany

Ministerstvo zdravotníctva Slovenskej republiky

Sídlo: Limbová 2, P.O. BOX 52, 837 52 Bratislava 37

Štatutárny orgán:

ministerka zdravotníctva

IČO: 00165565

IBAN:

(ďalej len „poskytovateľ“)

a

Názov: Univerzita Komenského, Jesseniova lekárska fakulta

Sídlo: Malá Hora 10701/4A, 036 01 Martin

Štatutárny orgán:

dekan

IČO: 00397865

IBAN:

Osoba zodpovedná za riešenie projektu v mene prijímateľa:

zodpovedná riešiteľka

(ďalej len „prijímateľ“)

Xxxxxx XX Predmet zmluvy

1. Poskytovateľ poskytuje účelovo určené finančné prostriedky na riešenie nižšie uvedeného projektu ako účelovú dotáciu (ďalej len „dotácia“) na podporu výskumu a vývoja podľa § 2 ods. 1 písm. a) zákona č. 525/2010 Z. z. o poskytovaní dotácií v pôsobnosti Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky (ďalej len „zákon č. 525/2010 Z. z.“). Na základe vyhlásenia verejnej výzvy poskytovateľom, uverejnenej na webovom sídle Ministerstva zdravotníctva SR, na predkladanie žiadostí o poskytnutie dotácie v oblasti zdravotníctva na účely výskumu a vývoja bol predložený projekt s názvom: Detekcia skorých štádií Parkinsonovej choroby pomocou flourescenčenej multifotónovej mikroskopie a FLIM analýzy, v prioritnom okruhu a v podporovanej oblasti vedecko-výskumnej problematiky slovenského zdravotníctva v roku 2018 – produktové línie domény č. 4 Zdravie obyvateľstva a zdravotnícke technológie.

2. Projekt má pridelené registračné číslo poskytovateľa 2018/10-UKMT-6 a tvorí prílohu č. 1 a prílohu č. 2 tejto zmluvy ako jej neoddeliteľnú súčasť (ďalej len „projekt“).

3. Prijímateľ sa zaväzuje zrealizovať projekt v súlade s jeho znením podľa prílohy č. 1 a prílohy č. 2 tejto zmluvy a na vlastnú zodpovednosť.

4. Celková výška nákladov na projekt predstavuje sumu vo výške 159 758,83 eur, z toho výška finančných prostriedkov poskytnutých prijímateľom na riešenie projektu je 49 758,83 eur. Poskytovateľ sa zaväzuje na účely projektu poskytnúť prijímateľovi dotáciu v celkovej výške 110 000,00 eur na obdobie realizácie projektu. Celkový rozpočet projektu je nemenný, s výnimkou zmien podľa čl. IV bodu 4 a čl. VII tejto zmluvy.

5. Dotácia je poskytnutá zo strany poskytovateľa na obdobie od nadobudnutia platnosti a účinnosti tejto zmluvy do dátumu uvedeného v projekte, najneskôr však do 31. marca 2021, vrátane finančných prostriedkov poskytnutých po 1. auguste príslušného rozpočtového roka, na ktorých použitie sa vzťahuje ustanovenie § 8 ods. 4 a 5 zákona č. 523/2004 Z. z. o rozpočtových pravidlách verejnej správy a o zmene a doplnení niektorých zákonov v znení neskorších predpisov (ďalej len „zákon č. 523/2004 Z. z.“).

6. Podľa § 8 ods. 4 zákona č. 523/2004 Z. z., v prípade použitia kapitálových výdavkov na určený účel v nasledujúcich 2 rozpočtových rokoch po rozpočtovom roku, na ktorý boli rozpočtované sa platnosť zmluvy predlžuje na obdobie do použitia týchto finančných prostriedkov a ich následného zúčtovania so štátnym rozpočtom.

Článok III

Práva a povinnosti prijímateľa dotácie

1. Prijímateľ je zodpovedný za odborné riadenie, finančné riadenie a realizáciu celého projektu.

2. Všetka komunikácia s poskytovateľom, týkajúca sa projektu, je realizovaná prostredníctvom prijímateľa písomnou formou.

3. Platby od poskytovateľa na realizáciu projektu prijíma prijímateľ.

4. Prijímateľ bezodkladne informuje poskytovateľa o všetkých skutočnostiach, ktoré by mohli ovplyvniť realizáciu projektu. Ak prijímateľ zistí, že povinnosti vyplývajúce zo zmluvy nemôže z rôznych príčin splniť, je povinný o tom bezodkladne písomne informovať poskytovateľa.

5. Prijímateľ je povinný archivovať všetky dokumenty, korešpondenciu a iné písomnosti týkajúce sa celého projektu najmenej po dobu 5 rokov od dátumu ukončenia realizácie projektu.

6. Prijímateľ je povinný poskytnúť poskytovateľovi na jeho vyžiadanie súčinnosť, požadované informácie a dokumenty týkajúce sa projektu.

7. Prijímateľ je povinný pri použití dotácie dodržať maximálnu hospodárnosť, efektívnosť a účinnosť jej použitia v súlade s § 19 ods. 3 zákona č. 523/2004 Z. z. ako aj ustanovenia zákona 343/2015 Z. z. o verejnom obstarávaní a o zmene a doplnení niektorých zákonov.

8. Prijímateľ je povinný byť držiteľom osvedčenia o spôsobilosti vykonávať výskum a vývoj alebo dokladu o spôsobilosti vykonávať výskum a vývoj v oblasti zdravotníctva najmenej po dobu troch rokov.

9. Prijímateľ sa zaväzuje financovať projekt aj z iných zdrojov a to vo výške najmenej 30% z celkových nákladov na projekt uvedených v čl. II bode 4 tejto zmluvy.

10. Všetky výskumné činnosti zahŕňajúce ľudských účastníkov, ľudské embryá, tkanivá ako aj výskumné činnosti používajúce zvieratá, musia byť schválené príslušnými etickými komisiami v súlade s príslušnými zákonmi a všeobecne záväznými predpismi.

Článok IV Podmienky poskytnutia dotácie

1. Dotácia sa poskytuje v súlade so zákonom č. 291/2002 Z. z. o Štátnej pokladnici a o zmene a doplnení niektorých zákonov v znení neskorších predpisov. Dotácia sa podľa čl. II bodu 4 poskytuje prijímateľovi po častiach. Na každý kalendárny rok realizácie projektu poskytovateľ poskytne prislúchajúcu časť dotácie prijímateľovi.

2. Prvú časť dotácie poskytne poskytovateľ najneskôr do 60 kalendárnych dní odo dňa podpísania tejto zmluvy oboma zmluvnými stranami. Druhú a tretiu časť dotácie poskytne poskytovateľ do 60 kalendárnych dní od začiatku príslušného rozpočtového roka. Poskytovateľ poskytne prijímateľovi dotáciu prevodom na účet prijímateľa uvedený v čl. I tejto zmluvy. Prostriedky sa považujú za poskytnuté dňom odpísania stanovenej sumy z účtu poskytovateľa.

3. Výška každej časti poskytnutej dotácie je stanovená v projekte ako suma finančných prostriedkov poskytovateľa požadovaná a schválená na realizáciu aktivít projektu naplánovaných na daný bežný rok alebo časť bežného roku.

4. V prípade nezabezpečenia dostatočných finančných prostriedkov účelovo určených na podporu výskumu a vývoja si poskytovateľ vyhradzuje právo pred poskytnutím každej časti dotácie prehodnotiť jej výšku a prípadné zmeny financovania projektu riešiť formou dodatku k zmluve, súčasťou ktorého bude zmena prílohy č. 2, t.j. zmena celkového a podrobného rozpočtu.

5. V prípade zmeny financovania projektu podľa bodu 4 tohto článku je prijímateľ povinný prepracovať projekt v súlade s požadovanými zmenami a prepracovaný projekt postúpiť poskytovateľovi na prehodnotenie. Projekt je ďalej postúpený na prehodnotenie Vedeckej rade Ministerstva zdravotníctva SR (ďalej len „vedecká rada“). Ak je vyjadrené kladné stanovisko k prepracovanému projektu, projekt je postúpený na schválenie ministrovi zdravotníctva. Ak je vyjadrené nesúhlasné stanovisko k prepracovanému projektu, projekt je vrátený prijímateľovi na opätovné prepracovanie s odôvodnením.

6. Prijímateľ doručí poskytovateľovi priebežnú odbornú a finančnú správu za predchádzajúci rozpočtový rok najneskôr do 30. apríla nasledujúceho rozpočtového roka. Správy sú predmetom schvaľovania vedeckej rady a poskytovateľa.

7. Po ukončení projektu predkladá prijímateľ poskytovateľovi záverečnú správu najneskôr do 30. apríla po ukončení projektu. Záverečná správa je predmetom schvaľovania vedeckej rady a poskytovateľa.

8. Správy, ktoré predkladá prijímateľ podľa bodu 6, 7 tohto článku, zasiela prijímateľ poskytovateľovi. Poskytovateľ má 120 pracovných dní odo dňa prijatia správ na:

a) schválenie správ,

b) písomné vyžiadanie dodatočných a vysvetľujúcich podkladov a informácií, ktoré sú nevyhnutné pre schválenie správ od prijímateľa písomnou formou,

c) písomné zamietnutie správ a požiadanie o predloženie nových správ písomnou formou,

d) písomné požiadanie prijímateľa o zorganizovanie oponentského konania.

Lehota 120 pracovných dní odo dňa prijatia správ môže byť v špecifických prípadoch predĺžená. O týchto špecifických prípadoch rozhoduje výlučne poskytovateľ.

9. V prípade situácie podľa bodu 8 písm. b), c) má prijímateľ 30 pracovných dní na predloženie požadovaných podkladov, informácií, resp. nových správ. Lehota 30 pracovných dní môže byť v odôvodniteľných prípadoch predĺžená na základe písomnej žiadosti prijímateľa a jej následného schválenia poskytovateľom pred uplynutím platnej lehoty.

10. V prípade situácie podľa bodu 8 písm. d) alebo vnútorného auditu / finančnej kontroly sa doba hodnotenia predlžuje o čas, ktorý je nutný na realizáciu týchto aktivít.

11. V prípade vyžiadania si nových správ podľa bodu 8 písm. c) tohto článku sa pri ich hodnotení postupuje v súlade s bodom 8 tohto článku. Ak nastane opätovné zamietnutie správ, poskytovateľ má právo odstúpiť od zmluvy o poskytnutí dotácie a požadovať od prijímateľa vrátenie poskytnutých finančných prostriedkov v plnej výške alebo len alikvotnú časť, ktorú stanoví poskytovateľ.

12. Finančné prostriedky poskytnuté poskytovateľom je prijímateľ povinný viesť na bežnom účte prijímateľa, osobitne zriadenom pre poskytnutú dotáciu v banke uvedenom v čl. I tejto zmluvy a to v inštitúcii, v ktorej si prijímateľ bežne vedie svoje účty. Právo disponovať s účtom a s prostriedkami vedenými na tomto účte má po celú dobu účinnosti tejto zmluvy prijímateľ. Prijímateľ je povinný bezodkladne písomne oznámiť poskytovateľovi všetky zmeny týkajúce sa účtu prijímateľa, s výnimkou účtovných obratov na účte prijímateľa, o ktorých bude prijímateľ informovať poskytovateľa v rámci pravidelných finančných správ.

13. Po ukončení projektu (z dôvodu riadneho ukončenia projektu alebo z rozhodnutia poskytovateľa na základe odporúčania vedeckej rady) je prijímateľ povinný nevyčerpanú dotáciu vrátiť na účet poskytovateľa uvedený v čl. I tejto zmluvy najneskôr do 30 kalendárnych dní od termínu riadneho ukončenia projektu alebo odo dňa odoslania písomného rozhodnutia poskytovateľa o ukončení projektu.

14. Všetky príjmy a výnosy z poskytnutých finančných prostriedkov poskytovateľa sú považované za príjem štátneho rozpočtu a prijímateľ je povinný ich vrátiť na účet poskytovateľa uvedený v článku I. tejto zmluvy spolu s nevyčerpanými finančnými prostriedkami do termínu pravidelného ročného zúčtovania finančných prostriedkov.

Článok V

Podmienky použitia dotácie

1. Poskytnutá dotácia je účelovo viazaná a prijímateľ sa zaväzuje použiť ju v zmysle

§ 19 ods. 1 a 3 zákona č. 523/2004 Z. z., v zmysle zákona č. 525/2010 Z. z. a výlučne na účel, ktorý je uvedený v čl. II bode 1 tejto zmluvy.

2. Prijímateľ nesmie použiť dotáciu na úhradu záväzkov z predchádzajúcich rozpočtových rokov a refundáciu výdavkov uhradených v predchádzajúcich rozpočtových rokoch.

3. Prijímateľ môže použiť dotáciu iba na úhradu nákladov, ktoré sú uvedené v prílohe č. 2 tejto zmluvy, Celkový a podrobný rozpočet projektu.

4. Prijímateľ môže v rámci projektu subkontrahovať výlučne také činnosti, ktoré nie je schopný sám vykonať vlastnými prostriedkami, materiálno-technickými a personálnymi. Suma nákladov vynaložených na subkontrahovanie v rámci celého projektu (vrátane vyššie uvedeného prípadu) nesmie presiahnuť 20% sumy poskytnutej dotácie zo štátneho rozpočtu od poskytovateľa.

5. Suma nákladov vynaložených na režijné náklady, náklady súvisiace s realizáciou projektu, v rámci celého projektu nesmie presiahnuť 7% sumy poskytnutej dotácie zo štátneho rozpočtu od poskytovateľa.

6. Objem kapitálových výdavkov nesmie prekročiť 30% financovania z celkových finančných nákladov poskytnutých poskytovateľom.

7. Prijímateľ sa zaväzuje, že:

a) žiadne osoby uvedené v Projektovom formulári a v Opisnom formulári projektu tejto zmluvy (s výnimkou osôb financovaných z vlastných zdrojov prijímateľa) v súčasnosti nie sú, v čase predkladania projektu ani v období

6 mesiacov pred predložením projektu neboli s prijímateľom v žiadnom pracovnom pomere,

b) všetky údaje uvedené v tejto zmluve sú v súlade s prílohou č. 1 a s prílohou č. 2 tejto zmluvy.

Článok VI

Kontrola plnenia zmluvy a realizácie projektu

1. Poskytovateľ je oprávnený kontrolovať dodržiavanie podmienok, za ktorých sa finančné prostriedky poskytli, ako aj ostatné skutočnosti, ktoré by mohli mať vplyv na správnosť a účelovosť poskytnutej dotácie. Za týmto účelom je poskytovateľ oprávnený vykonať administratívnu finančnú kontrolu, finančnú kontrolu na mieste hospodárenia s poskytnutou dotáciou a vnútorný audit

podľa zákona č. 357/2015 Z. z. o finančnej kontrole a audite a o zmene a doplnení niektorých zákonov (ďalej len „zákon č. 357/2015 Z. z.) u prijímateľa. Prijímateľ je povinný vytvoriť poskytovateľovi alebo ním určeným osobám vykonávajúcim kontrolu / vnútorný audit primerané podmienky na riadne a včasné vykonanie kontroly

/ vnútorného auditu, poskytnúť im potrebnú súčinnosť a všetky požadované informácie a listiny týkajúce sa najmä riešenia projektu, stavu jeho rozpracovanosti, špecifikácie použitia dotácie, predpokladaného ďalšieho použitia finančných prostriedkov a pod..

2. Poskytovateľ je oprávnený požadovať realizáciu oponentského konania s cieľom odborného preskúmania realizácie projektu. Prijímateľ je povinný kompletne zabezpečiť realizáciu oponentského konania, poskytnúť všetky požadované dokumenty a informácie najneskôr 30 kalendárnych dní pred termínom realizácie oponentského konania. Ďalej je povinný poskytnúť svoju súčinnosť pri oponentskom konaní.

3. Prijímateľ sa zaväzuje, že písomné upozornenia a pokyny poskytovateľa, ako výsledok oponentského konania, zohľadní pri ďalšom vykonávaní projektu a vzniknuté nezrovnalosti alebo prípadný nesúlad s touto zmluvou odstráni bez zbytočného odkladu po doručení predmetného upozornenia.

4. Prijímateľ doručí poskytovateľovi priebežnú odbornú a finančnú správu v súlade s čl. IV bodom 6, na základe ktorej poskytovateľ vykoná priebežné hodnotenie projektu dvomi členmi vedeckej rady a navrhne ďalšie financovanie projektu v zmysle nasledujúcej schémy:

a) splnil očakávané ciele vynikajúco, t. j. plnenie cieľov projektu je v rozsahu viac ako 80% a čerpanie pridelenej dotácie je v súlade so zmluvou,

b) splnil očakávané ciele, t. j. aspoň jeden z hodnotiteľov hodnotí iba čiastočné plnenie cieľov projektu v rozsahu 50 – 80%,

c) nesplnil očakávané ciele, t. j. prijímateľ plní ciele projektu v rozsahu menej ako 50%.

5. V prípade bodu 4 písm. b) tohto článku môže vedecká rada navrhnúť vykonanie finančnej kontroly u prijímateľa podľa zákona č. 357/2015 Z. z.. V prípade neúčelného použitia finančných prostriedkov bude poskytovateľ postupovať v súlade so závermi kontroly.

6. V prípade bodu 4 písm. c) je poskytovateľ oprávnený požiadať prijímateľa o vrátenie poskytnutých finančných prostriedkov, ak hodnotiteľ zistí čerpanie dotácie na iné účely, prípadne ak sa v priebehu príslušného rozpočtového roka nerealizuje žiadna aktivita v projekte. Prijímateľ môže v prípade ukončenia projektu požiadať

o oponentské konanie.

7. V prípade ukončenia (odstúpenia od) zmluvy sa osoba zodpovedná za riešenie projektu v mene prijímateľa nebude môcť uchádzať o dotáciu v oblasti zdravotníctva na účely výskumu a vývoja v nasledujúcej vyhlásenej verejnej výzve uverejnenej na webovom sídle Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky.

8. Priebežné a záverečné správy sú predmetom ročného a záverečného hodnotenia poskytovateľa a musia obsahovať všetky náležitosti v súlade s čl. VIII bodom 2 a 3.

9. Po ukončení projektu predkladá prijímateľ poskytovateľovi záverečnú správu v súlade s čl. IV bodom 7, na základe ktorej poskytovateľ vykoná záverečné hodnotenie projektu dvomi členmi vedeckej rady a navrhne záverečné hodnotenie projektu v zmysle nasledujúcej schémy:

a) splnil očakávané ciele vynikajúco, t. j. splnenie cieľov projektu je v rozsahu viac ako 80%, pri ktorom je potrebné súhlasné stanovisko dvoch členmi vedeckej rady,

b) splnil očakávané ciele, t. j. aspoň jeden z hodnotiteľov hodnotí iba čiastočné splnenie cieľov projektu v rozsahu 50 – 80%,

c) nesplnil očakávané ciele, t. j. jeden z hodnotiteľov hodnotí nesplnenie cieľov projektu v rozsahu menej ako 50%.

10. V prípade bodu 9 písm. b) tohto článku môže vedecká rada navrhnúť vykonanie finančnej kontroly u prijímateľa podľa zákona č. 357/2015 Z. z.. V prípade neúčelného použitia finančných prostriedkov bude poskytovateľ postupovať v súlade so závermi kontroly.

11. V prípade bodu 9 písm. c) tohto článku sa osoba zodpovedná za riešenie projektu v mene prijímateľa nebude môcť uchádzať o dotáciu v oblasti zdravotníctva na účely výskumu a vývoja v nasledujúcej vyhlásenej verejnej výzve uverejnenej na webovom sídle Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky.

12. Poskytovateľ je oprávnený požadovať od prijímateľa vrátenie neoprávnene použitých finančných prostriedkov na základe hodnotenia členov vedeckej rady (v prípade bodu 9 písm. c)) a vykonanej kontroly.

Článok VII

Zmeny podmienok zmluvy

1. Poskytovateľ ani prijímateľ nemajú právny nárok na zmenu zamerania a cieľov projektu ani na akúkoľvek inú zmenu projektu, ktorá by viedla k zmene jeho zamerania a cieľov s výnimkou zmien podľa čl. IV bodu 4.

2. Prijímateľ má právny nárok na vykonanie nasledovných zmien v projekte, ak sa tým neporuší ustanovenie bodu 1 tohto článku:

a) zmeny rozpočtu projektu presunom finančných prostriedkov zo štátneho rozpočtu medzi jednotlivými položkami ekonomickej klasifikácie určených na bežné výdavky (príloha č. 2 tejto zmluvy, Celkový a podrobný rozpočet projektu), ak v priebehu jedného rozpočtového roka presun finančných prostriedkov spôsobí kumulatívne zmenu celkových finančných prostriedkov určených na bežné výdavky do 20%,

b) zmeny rozpočtu projektu presunom finančných prostriedkov zo štátneho rozpočtu medzi jednotlivými položkami ekonomickej klasifikácie určených

na bežné výdavky (príloha č. 2 tejto zmluvy, Celkový a podrobný rozpočet projektu), ak v priebehu jedného rozpočtového roka presun týchto finančných prostriedkov spôsobí kumulatívne zmenu celkových finančných prostriedkov určených na bežné výdavky o viac ako 20%,

c) zmena plánovaného harmonogramu projektu,

d) zmeny v riešiteľskom kolektíve s výnimkou zmeny na pozícii zodpovedného riešiteľa.

3. Prijímateľ má právny nárok na vykonanie zmien rozpočtu projektu presunom finančných prostriedkov zo štátneho rozpočtu medzi jednotlivými položkami ekonomickej klasifikácie určených na kapitálové výdavky (príloha č. 2 tejto zmluvy, Celkový a podrobný rozpočet projektu). O všetkých zmenách súvisiacich so zmenou výšky finančných prostriedkov určených na kapitálové výdavky je prijímateľ povinný písomne informovať poskytovateľa doručením aktuálne platnej upravenej časti projektu a samostatného popisu vykonaných zmien. O týchto zmenách rozhoduje poskytovateľ a musia byť vykonané po prijatí písomného súhlasu zo strany poskytovateľa.

4. Prijímateľ má právny nárok na vykonanie zmien rozpočtu projektu presunom finančných prostriedkov z vlastných zdrojov medzi jednotlivými položkami ekonomickej klasifikácie určenými na bežné a kapitálové výdavky pri dodržaní podmienky zabezpečenia najmenej 30% financovania projektu z iných zdrojov. O týchto zmenách je prijímateľ povinný písomne informovať poskytovateľa doručením aktuálne platnej upravenej časti projektu a samostatného popisu vykonaných zmien s uvedením dátumu vykonanej zmeny do 30 kalendárnych dní odo dňa vykonania zmeny. Všetky upravené časti projektu sa stávajú súčasťou zmluvy.

5. Prijímateľ má právny nárok na vykonanie zmien rozpočtu navýšením, prípadne znížením, finančných prostriedkov z vlastných zdrojov pri dodržaní podmienky zabezpečenia najmenej 30% financovania projektu z iných zdrojov. O týchto zmenách je prijímateľ povinný písomne informovať poskytovateľa doručením aktuálne platnej upravenej časti projektu a samostatného popisu vykonaných zmien s uvedením dátumu vykonanej zmeny do 30 kalendárnych dní odo dňa vykonania zmeny. Všetky upravené časti projektu sa stávajú súčasťou zmluvy.

6. O zmenách uvedených v bode 2 písm. a) až d) je prijímateľ povinný písomne informovať poskytovateľa doručením aktuálne platnej upravenej časti projektu a samostatného popisu vykonaných zmien. V prípade situácie podľa bodu 2 písm. a) tohto článku je prijímateľ povinný uviesť taktiež dátum vykonanej zmeny a doručiť aktuálne platnú upravenú časť projektu vrátane samostatného popisu zmien do 30 kalendárnych dní odo dňa vykonania zmeny. Všetky zmeny sa prikladajú k zmluve.

7. Akékoľvek iné zmeny v projekte nad rámec zmien uvedených v bode 2 tohto článku, ktoré nenarúšajú ustanovenie v bode 1 tohto článku musia byť vopred schválené poskytovateľom. Na akúkoľvek zmenu podľa predchádzajúcej vety nemá prijímateľ právny nárok.

8. Prijímateľ je povinný zaslať písomnú žiadosť o schválenie zmien podľa bodu 7 tohto článku minimálne 30 kalendárnych dní pred plánovanou zmenou. Žiadosť

o schválenie zmien obsahuje identifikáciu zmeny, jej zdôvodnenie a novú aktualizovanú časť, ktorej sa zmena týka. V prípade, že žiadosť nebude obsahovať uvedené náležitosti, bude zamietnutá.

9. Zmeny, ktoré menia znenie zmluvy musia byť vykonané formou písomného dodatku k tejto zmluve, podpísaným oboma zmluvnými stranami najmenej 5 pracovných dní pred vykonaním požadovanej zmeny, ak poskytovateľ nerozhodne inak. V súvislosti s akceptáciou žiadosti o schválenie zmien môže byť v špecifických prípadoch

o stanovisko požiadaná vedecká rada. O týchto špecifických prípadoch rozhoduje výlučne poskytovateľ.

10. Zmeny, ktoré sa týkajú príloh tejto zmluvy, s výnimkou zmien podľa bodu 2 písm. a) tohto článku, musia byť vykonané na základe písomného súhlasu poskytovateľa.

11. V prípade zmien podľa bodu 9 tohto článku je prijímateľ oprávnený uskutočniť požadované zmeny až po nadobudnutí platnosti a účinnosti dodatku k zmluve. V prípade zmien podľa bodu 10 tohto článku je prijímateľ oprávnený uskutočniť požadované zmeny až po prijatí písomného súhlasu poskytovateľa.

Článok VIII Správy, publicita

1. Prijímateľ predkladá priebežné správy a záverečnú správu v súlade s čl. IV bodom 6 a 7 tejto zmluvy a správu o spoločenských a ekonomických prínosoch výsledkov riešenia projektu v súlade s bodom 5 tohto článku. Priebežné správy a taktiež záverečnú správu predkladá prijímateľ dotácie v písomnej podobe v slovenskom jazyku v troch vyhotoveniach a v elektronickej forme (napr. na CD nosiči, USB a pod.) na adresu poskytovateľa, uvedenú v čl. I tejto zmluvy. Všetky písomné správy sa vyhotovujú v jednom origináli a v dvoch kópiách.

2. Priebežné správy pozostávajú z identifikačnej časti, odbornej správy a finančnej správy. Priebežné správy sú vypracovávané na predpísaných formulároch poskytovateľa a musia obsahovať najmä:

- analýzu stavu riešenia projektu za sledované obdobie, popis vykonaných prác, progres v projekte počas monitorovaného obdobia,

- popis výsledkov projektu dosiahnutých za monitorované obdobie (aj čiastkové),

- problémy, riziká, odporúčania,

- odchýlky od pôvodného plánu vrátane zdôvodnenia,

- kópie prvej strany knižnej publikácie spolu s tirážou

- kópie publikácií, abstraktov z kongresov, citácie a dokumenty, ktoré boli vyprodukované počas sledovaného obdobia a súvisia s projektom,

- správy z vykonaných zahraničných ciest súvisiacich s riešením projektu,

- potvrdenie o prijatí patentu, resp. hodnoverného dokladu o zavedení novej liečebnej alebo diagnostickej metódy alebo podané patentové prihlášky,

- potvrdenie o uzatvorení medzinárodnej spolupráce a medzinárodnom grante v nadväznosti na riešenú problematiku, program organizovaného sympózia,

- plánované aktivity na nasledujúce obdobie realizácie projektu, prípadné zmeny oproti schválenému harmonogramu a odôvodnenie týchto zmien, vychádzajúc zo skutočného stavu riešenia projektu,

- potvrdenie o prijatí študenta doktorandského štúdia, resp. úspešné ukončenie štúdia obhajobou,

- stav riešiteľského tímu.

3. Záverečná správa pozostáva z identifikačnej časti, odbornej správy a finančnej správy. Záverečná správa sa predkladá podľa čl. IV bodu 7 tejto zmluvy a na predpísanom formulári poskytovateľa. Záverečná správa okrem iného musí obsahovať najmä:

- správu o vykonaných činnostiach,

- popis všetkých výsledkov získaných pri riešení úlohy, potvrdenie o prijatí patentu, resp. hodnoverného dokladu o zavedení novej liečebnej alebo diagnostickej metódy alebo podané patentové prihlášky,

- kópie prvej strany knižnej publikácie spolu s tirážou, kópie abstraktov z kongresov a úplné citácie všetkých publikovaných prác, súvisiacich s projektom popisujúcich získané výsledky, ohlasy na publikácie a najmä pre úlohy aplikovaného charakteru i spôsob využitia získaných výsledkov,

- potvrdenie o uzatvorení medzinárodnej spolupráce a medzinárodnom grante v nadväznosti na riešenú problematiku, program organizovaného sympózia,

- potvrdenie o prijatí študenta doktorandského štúdia, resp. úspešné ukončenie štúdia obhajobou,

- odovzdanie riešenia projektu,

- odborné zhodnotenie projektu.

4. Finančné správy (ako súčasť priebežných správ a záverečnej správy) musia obsahovať najmä:

- tabuľkové porovnanie schváleného celkového a podrobného rozpočtu na základe zmluvy o poskytnutí dotácie z rozpočtovej kapitoly Ministerstva zdravotníctva a najaktuálnejšej schválenej verzie celkového a podrobného rozpočtu v monitorovanom období,

- čestné vyhlásenie štatutárneho orgánu, že poskytnuté finančné prostriedky boli čerpané v súlade so zmluvou o poskytnutí dotácie z rozpočtovej kapitoly Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky, avízo o vrátení výnosov z poskytnutej dotácie, avízo o vrátení nevyčerpanej dotácie na účet Ministerstva zdravotníctva Slovenskej republiky uvedený v čl. I.

5. Pri zverejňovaní akýchkoľvek výsledkov alebo čiastkových výsledkov projektu, na ktorý prijímateľ získal finančnú podporu poskytovateľa, musí prijímateľ na viditeľnom mieste zverejniť poznámku: „Táto práca bola podporovaná

Ministerstvom zdravotníctva Slovenskej republiky v rámci projektu s registračným číslom 2018/10-UKMT-6.“ V prípade zverejnenia v anglickom jazyku bude znenie nasledovné: „This work was supported by Ministry of Health of the Slovak Republic under the project registration number 2018/10-UKMT-6“, v prípade medzinárodnej spolupráce je možné použiť medzinárodne dohodnutú formu oznamu.

6. Poskytovateľ si vyhradzuje právo požadovať od prijímateľa ďalšie správy a informácie o priebehu projektu nad rámec správ uvedených v tomto článku.

Článok IX Zúčtovanie a vyúčtovanie dotácie

1. Podľa § 8a ods. 7 zákona č. 523/2004 Z. z. podlieha použitie dotácií povinnému zúčtovaniu so štátnym rozpočtom, ktorého spôsob určuje ministerstvo financií; pri zúčtovaní finančných vzťahov so štátnym rozpočtom sa nevyčerpané prostriedky nevracajú, ak ich suma nepresiahne 5 eur (slovom päť eur). Termín na odvod výnosov z prostriedkov štátneho rozpočtu je najneskôr k termínu povinného zúčtovania so štátnym rozpočtom.

2. Finančné vyúčtovanie dotácie je základnou podmienkou pre poskytnutie dotácie v nasledujúcom rozpočtovom roku. Prijímateľ je povinný pripraviť finančné vyúčtovanie tak, aby obsahovalo všetky dôležité listinné dôkazy preukazujúce účel použitia dotácie a dokazujúce skutočnosti vzťahujúce sa na použitie dotácie a prostriedkov spolufinancovania. Výdavky musia byť zdôvodnené, identifikovateľné, kontrolovateľné a dokladované faktúrami alebo inými účtovnými dokladmi, ktoré sú v súlade s platnými právnymi predpismi Slovenskej republiky. Výdavky musia byť náležite zaznamenané v účtovnej evidencii prijímateľa dotácie. Prijímateľ je povinný zaslať vyúčtovanie projektu v jednom vyhotovení. Termín vyúčtovania určuje poskytovateľ, pričom prijímateľ je informovaný o termíne vyúčtovania prostredníctvom oficiálneho oznámenia listom.

3. Originály finančných účtovných dokladov je prijímateľ povinný archivovať po dobu najmenej 5 rokov od ukončenia projektu, t.j. od uplynutia dátumu podľa čl. II, bodu 5 tejto zmluvy.

4. V prípade, že prijímateľ dotácie nie je schopný dodržať stanovený termín vyúčtovania dotácie, je povinný požiadať Ministerstvo zdravotníctva Slovenskej republiky

o predĺženie termínu. Žiadosť musí byť Ministerstvu zdravotníctva Slovenskej republiky zaslaná najneskôr do 15 kalendárnych dní pred stanoveným termínom vyúčtovania. Ministerstvo zdravotníctva Slovenskej republiky nie je povinné žiadosti vyhovieť, je však povinné o nej rozhodnúť a rozhodnutie zaslať prijímateľovi dotácie.

5. Finančné vyúčtovanie poskytnutej dotácie a prostriedkov spolufinancovania, vypracované v súlade so zákonom č. 431/2002 Z. z. o účtovníctve v znení neskorších predpisov, obsahuje písomný prehľad a predloženie čitateľných fotokópií dokladov (vrátane fotokópií účtovných dokladov) preukazujúcich použitie dotácie a prostriedkov

spolufinancovania. Za správnosť údajov uvedených vo finančnom vyúčtovaní zodpovedá osoba, ktorá podpisuje vyúčtovanie poskytnutej dotácie a štatutárny orgán prijímateľa.

6. V prípade zistenia nedostatkov v súvislosti s dodržaním maximálnej hospodárení, efektívnosti alebo účinnosti použitia dotácie v súlade s § 19 ods. 3 zákona č. 523/2004 Z. z. poskytovateľ zastaví poskytovanie ďalších finančných prostriedkov prijímateľovi, až do ich odstránenia.

7. V prípade, že prijímateľ dotácie nepredloží v termíne stanovenom poskytovateľom finančné vyúčtovanie, alebo neodstráni nedostatky v stanovenom termíne, je povinný poskytnutú dotáciu v plnom rozsahu vrátiť na účet uvedený v zmluve, v čl. I.

Článok X Sankcie

1. V prípade, že prijímateľ poruší finančnú disciplínu v zmysle § 31 ods. 1 zákona č. 523/2004 Z. z. je povinný odviesť finančné prostriedky vo výške porušenia finančnej disciplíny, penále a pokutu podľa § 31 ods. 3 až 6 zákona č. 523/ 2004 Z. z.

2. Štatutárny orgán prijímateľa je povinný priebežne kontrolovať priebeh prác spojených s realizáciou projektu a čerpanie poskytnutých finančných prostriedkov. Ak zistí, porušenia tejto zmluvy, predpisov o hospodárení s majetkom štátu, alebo porušenie finančnej disciplíny v zmysle zákona č. 523/2004 Z. z pozastaví realizáciu platieb a bezodkladne písomne informuje o tejto skutočnosti poskytovateľa.

3. V prípade, ak prijímateľ nesplní niektorú z povinností vyplývajúcich z tejto zmluvy, poskytovateľ má právo:

a) odstúpiť od zmluvy a požadovať od prijímateľa vrátenie poskytnutej dotácie. Výpovedná lehota je určená na 30 kalendárnych dní a začína plynúť od prvého dňa nasledujúceho mesiaca po doručení písomného odstúpenia od zmluvy druhej zmluvnej strane,

b) pozastaviť financovanie projektu s okamžitou účinnosťou na obdobie stanovené poskytovateľom. Akékoľvek čerpanie finančných prostriedkov udelených poskytovateľom po doručení písomného oznámenia o pozastavení financovania sa považuje za neoprávnené až do momentu doručenia písomného oznámenia poskytovateľa o ukončení tohto pozastavenia,

c) ukončiť financovanie projektu s okamžitou účinnosťou. Akékoľvek čerpanie finančných prostriedkov po doručení písomného oznámenia o ukončení financovania sa považuje za neoprávnené.

Uvedené práva nadobúdajú účinnosť dňom doručenia písomného oznámenia prijímateľovi s výnimkou písm. a).

Prijímateľ je povinný vrátiť poskytovateľovi poskytnutú dotáciu na riešenie projektu do 30 kalendárnych dní od vypovedania zmluvy (písm. a)) alebo ukončenia financovania

projektu s okamžitou účinnosťou (písm. c)) na účet poskytovateľa uvedený v čl. I tejto zmluvy.

4. V prípade neúčelného, nehospodárneho, neefektívneho alebo neúčinného čerpania a použitia finančných prostriedkov, resp. čerpania a použitia finančných prostriedkov v rozpore s podmienkami stanovenými v zmluve je prijímateľ povinný na základe oznámenia poskytovateľa vrátiť tieto finančné prostriedky na účet poskytovateľa uvedeného v čl. I v lehote stanovenej oznámením.

Článok XI Ukončenie zmluvného vzťahu

1. Prijímateľ môže odstúpiť od zmluvy zaslaním písomnej žiadosti poskytovateľovi

60 kalendárnych dní pred dňom nadobudnutia účinnosti tejto žiadosti s uvedením dôvodov. V prípade akceptácie tejto žiadosti poskytovateľom a v súlade s bodom 2 tohto článku, poskytovateľ:

a) vyzve prijímateľa na realizáciu oponentského konania a ďalej sa postupuje v zmysle čl. VI bodu 2 tejto zmluvy a prijímateľ je povinný dodať záverečnú správu,

b) zrealizuje fyzickú kontrolu projektu v súlade s čl. VI bodom 1 tejto zmluvy a prijímateľ je povinný dodať záverečnú správu.

2. Pred riadnym splnením záväzkov podľa tejto zmluvy, t. j. pred skončením jej platnosti, môže poskytovateľ odstúpiť od zmluvy a prijímateľ je povinný do 30 dní bezodkladne vrátiť poskytnutú dotáciu poskytovateľovi v plnom rozsahu.

3. Odstúpenie od zmluvy je účinné dňom doručenia písomného oznámenia poskytovateľa

o odstúpení prijímateľa.

Článok XII Vlastníctvo výsledkov projektu

1. Výsledky projektu sú spoločným vlastníctvom zmluvných strán v miere, akou spolufinancujú projekt. Jedna zmluvná strana môže poskytnúť výsledky projektu inému subjektu až po predchádzajúcom písomnom súhlase druhej zmluvnej strany.

2. Prijímateľ zabezpečí ochranu výsledku / výsledkov riešenia projektu.

3. V otázkach ochrany duševného vlastníctva sa zmluvné strany riadia príslušnými právnymi predpismi, najmä zákonom č. 185/2015 Z. z. Autorským zákonom v znení neskorších predpisov, zákonom č. 527/1990 Zb. o vynálezoch, priemyselných vzoroch a zlepšovacích návrhoch v znení neskorších predpisov, zákonom č. 435/2001 Z. z. o patentoch, dodatkových ochranných osvedčeniach a o zmene a doplnení niektorých zákonov (patentový zákon) v znení zákona č. 402/2002 Z. z., zákonom č. 90/1993 Z. z. o opatreniach v oblasti priemyselného vlastníctva, zákonom č. 444/2002 Z. z. o dizajnoch

v znení zákona č. 344/2004 Z. z. a zákonom č. 517/2007 Z. z. o úžitkových vzoroch a o zmene a doplnení niektorých zákonov. Všetky majetkové práva sa po ukončení projektu uvedú do súladu s platnými právnymi predpismi, najmä podľa príslušných ustanovení zákona č. 278/1993 Z. z. o správe majetku štátu v znení neskorších predpisov.

4. Zmluvné strany sú oprávnené použiť výsledok projektu, ktorý je chránený právom priemyselného alebo iného duševného vlastníctva len na účel majiteľa práv k priemyselnému a inému duševnému vlastníctvu.

5. Využitie výsledkov projektu nad rámec cieľov projektu, pre podnikateľskú a inú činnosť, podlieha súhlasu poskytovateľa.

6. Spory, ktoré vzniknú medzi zmluvnými stranami vo veciach vlastníctva výsledkov úlohy, sa budú zmluvné strany snažiť vyriešiť cestou mimosúdneho zmieru.

7. Práva a záväzky vyplývajúce z vlastníctva k riešeniu projektu prechádzajú v odôvodnených prípadoch na právnych nástupcov zmluvných strán.

8. Hore uvedené práva a povinnosti zmluvných strán vo veci vlastníctva zostávajú v platnosti aj po ukončení platnosti tejto zmluvy, a to časovo neobmedzene k nechráneným výsledkom riešenia úlohy a počas doby platnosti priemyselného práva k chráneným výsledkom riešenia úlohy.

Článok XIII Záverečné ustanovenia

1. Táto zmluva nadobúda platnosť dňom jej podpísania oboma zmluvnými stranami a účinnosť dňom, ktorý nasleduje po dni zverejnenia v Centrálnom registri zmlúv. Projekt je zverejňovaný v Centrálnom registri projektov.

2. Zmluvné strany berú na vedomie, že podľa § 5a ods. 1 zákona č. 211/2000 Z. z.

o slobodnom prístupe k informáciám v znení neskorších predpisov ide v prípade tejto zmluvy a jej dodatkov o povinne zverejňovanú zmluvu.

3. Zmluva sa uzatvára na dobu určitú podľa čl. II bodu 5 tejto zmluvy.

4. Každá zo zmluvných strán sa zaväzuje písomne a bez zbytočného odkladu oznámiť druhej zmluvnej strane všetky zmeny identifikačných údajov, uvedených v čl. I tejto zmluvy, resp. akúkoľvek inú zmenu skutočností a právnych pomerov, ktoré by mohli mať vplyv na práva alebo záväzky vyplývajúce z tejto zmluvy.

5. Zmeny k tejto zmluve je možné vykonať len na základe súhlasu obidvoch zmluvných strán formou písomných dodatkov k zmluve, s výnimkou zmien uvedených v čl. VII bode 2, 3, 4 a v bode 5.

Za zmenu zmluvy je potrebné považovať aj zmenu ktorejkoľvek zmluvnej strany,

t.j. najmä zmenu fyzickej osoby, zmenu označenia právnickej osoby, vrátane zmeny jej právnej formy.

6. Zmluvné strany sa zaväzujú riešiť svoje spory dohodou. V prípade, ak sa zmluvné strany nedohodnú, je akákoľvek zmluvná strana oprávnená sa s vecou obrátiť na súd.

7. Táto zmluva je vyhotovená v štyroch rovnocenných exemplároch, pričom jeden originál ostáva u prijímateľa a tri originály ostávajú u poskytovateľa.

8. Neoddeliteľnou súčasťou zmluvy sú nasledovné prílohy:

Príloha č. 1 – Vyplnený projekt (Projektový formulár a Opisný formulár projektu) Príloha č. 2 – Rozpočet projektu (Celkový a podrobný rozpočet projektu)

9. Počas realizácie projektu sa zmluvné strany riadia všeobecne záväznými právnymi predpismi a ostatnými predpismi vzťahujúcimi sa k tejto zmluve, ktorými sú najmä: zákon č. 525/2010 Z. z., zákon č. 578/2004 Z. z. o poskytovateľoch zdravotnej starostlivosti, zdravotníckych pracovníkoch, stavovských organizáciách v zdravotníctve a o zmene a doplnení niektorých zákonov v znení neskorších predpisov, Občiansky zákonník, zákon č. 343/2015 Z. z. o verejnom obstarávaní a o zmene a doplnení niektorých zákonov v znení zákona č. 438/2015 Z. z., zákon č. 523/2004 Z. z., zákon č. 18/1996 Z. z. o cenách v znení v neskorších predpisov, zákon o štátnom rozpočte na príslušný rozpočtový rok.

10. Poskytovateľ si vyhradzuje právo znížiť výšku dotácie z dôvodu nedostatku finančných prostriedkov v rozpočte v súvislosti s viazaním výdavkov štátneho rozpočtu, o čom písomne upovedomí prijímateľa. V takomto prípade poskytovateľ nezodpovedá prijímateľovi za vzniknuté výdavky, prípadne škody.

11. Zmluvné strany vyhlasujú, že ich spôsobilosť a voľnosť uzavrieť túto zmluvu, ako aj spôsobilosť k súvisiacim právnym úkonom nie sú žiadnym spôsobom obmedzené alebo vylúčené. Zmluvné strany si zmluvu riadne prečítali, porozumeli jej obsahu a na znak súhlasu s ňou ju slobodne a vážne podpisujú.

12. Príjemca čestne vyhlasuje, že všetky údaje uvedené v tejto zmluve, vrátane jej príloh, sú úplné, pravdivé, presné a poskytnuté dobrovoľne.

V Bratislave dňa ... V Martine dňa ...

.............................................. ...................................................

ministerka zdravotníctva dekan

poskytovateľ prijímateľ

Vyplnený projekt

18

(Projektový formulár a Opisný formulár projektu)

Rozpočet projektu

19

(Celkový a podrobný rozpočet projektu)

PROJEKTOVÝ FORMULÁR Príloha č. 3. 1. A.

PROJECT REQUEST FORM Annex Nr. 3. 1. A.

VV-2018-P1		Základné informácie o projekte
		Basic information about the project
01	Identifikačné číslo projektu	2018/10-UKMT-6
	Project ID
02	Názov projektu	Detekcia skorých štádií Parkinsonovej choroby pomocou fluorescenčnej multifotónovej mikroskopie a FLIM analýzy.
	Project Title	Detection of early stages of Parkinson's disease by fluorescence multiphoton microscopy and FLIM analysis.
03	Akronym projektu	PADIFLIM
	Acronym of the Project	PADIFLIM
04	Podporovaná oblasť zo schváleného zoznamu na daný rok	Inovatívne diagnostické a terapeutické postupy a produkty personalizovanej / precíznej medicíny; Včasná, rýchla a validná diagnostika
	Supported priority areas chosen from the approved list for a current year	Innovative diagnostic and therapeutic procedures and products of personalized / precision medicine; Timely, fast and valid diagnostics
05	Súhrnná informácia o projekte	Parkinsonova choroba je progresívne neurodegeneratívne ochorenie manifestované motorickými symptómami ako sú tremor, svalová stuhnutosť, či poruchy postoja. Klinickými nemotorickými prejavmi sú napr. zápcha, dysosmia či dysfágia, ktoré signalizujú prítomnosť ochorenia ešte pred samotným zhoršením motorických funkcií. Viaceré štúdie animálnych modelov identifikovali zmeny periférneho nervového systému ďaleko pred začiatkom degenerácie CNS. Nejasným stále ostáva mechanizmus progresie, časový priebeh patológie v periférnych anatomických štruktúrach, ako aj možnosti diagnostiky týchto skorých štádií ochorenia. Medzi hlavné znaky ochorenia na bunkovej úrovni patrí prítomnosť cytoplazmatických inklúzií-Lewyho teliesok s agregovaným a-synukleínom ako hlavnou zložkou. Akumulácia α-synukleínu bola pozorovaná aj v periférnych tkanivách, a to omnoho skôr ako sa patológia prejavila na centrálnej úrovni. Presná identifikácia skorých štádií ochorenia je limitáciou nástrojom pri rozvoji včasnej diagnostiky a/alebo prevencie PD. Cieľom našej práce je zaviesť mikroskopickú analýzu agregovaných proteínov v tkanivách zvieracích modeloch schopnú presne a citlivo detekovať skoršie štádiá ochorenia.
	Lay Summary	Parkinson's disease is a progressive neurodegenerative disorder manifested by motor symptoms such as tremor, muscle stiffness, or posture disorder. Clinical non-motoric manifestations include constipation, dyssomia or dysphagia that indicate the presence of the disease before the impairment of motor function. Animal model studies identified changes in the peripheral nervous system far before the CNS degeneration. The mechanism of progression, pathology time course in peripheral tissues, and options of disease early stages diagnostics remain unclear. Cell-pathology is characterized mainly by the presence cytoplasmic inclusions with aggregated α-synuclein as the main component. Aggregated α- synuclein in peripheral tissues appears much earlier than central pathology. Accurate identification of early stages of the disease is a

		critical for early diagnosis and/or prevention of PD. The aim of our work is to present a microscopic analysis of aggregated proteins in tissues of animal models capable of accurate and sensitive detection of earlier stages of the disease.
06	Ciele navrhovaného projektu	1. Optimalizácia detekcie agregátov α-synukleínu pomocou multifotónovej konfokálnej mikroskopie a FLIM (stanovenie životnosti fluorescencie) analýzy v živých neuronálnych bunkách 2. Analýza tvorby agregátov α-synukleínu a ich kolokalizácie s jednotlivými bunkovými štruktúrami v neuronálnych bunkových líniách 3. Stanovenie časového priebehu šírenia patologických zmien (agregácia α-synukleínu) v jednotlivých morfologicko- anatomických štruktúrach PNS a CNS v myšacom modeli patogenézy Parkinsonovej choroby v PNS, založenom na orálnej aplikácii rotenónu. 4. Možnosti diagnostiky skorých štádií ochorenia - detekcia agregátov α-synukleínu vo vitálnych tkanivách/biopsiách v periférnych a centrálnych anatomických štruktúrach v myšacom modeli patogenézy Parkinsonovej choroby v PNS pomocou FLIM analýzy.
	Objectives of the Proposed Project	1. Optimization of α-synuclein aggregation detection by multi- photon confocal microscopy and FLIM (fluorescence lifetime imaging) analysis in living neuronal cells 2. Analysis of α-synuclein aggregates formation and their colocalization with cellular structures in neuronal cell lines 3. The time course analysis of pathology spread (aggregation of α- synuclein) in in peripheral and central tissues in mouse model of Parkinson's disease based oon oral administration of rotenone. 4. Diagnostics of early stages of disease - Detection of α-synuclein aggregates in vital tissues / biopsies in peripheral and central tissues in mouse model of Parkinson's disease pathogenesis in PNS, using FLIM analysis.
07	Začiatok riešenia projektu	11/2018
	Start of the Project
08	Koniec riešenia projektu	12/2020
	End of the Project
09	Žiadateľ	Univerzita Komenského v Bratislave Jesseniova lekárska fakulta v Martine
	Applicant	Comenius University in Bratislava Xxxxxxxxx Faculty of Medicine in Martin
10	Zodpovedný riešiteľ
	Principal Investigator
11	Požadované finančné prostriedky z MZ SR (v EUR)	110 000,00
	Required Budget from the Ministry of Health (in EUR)
12	Spolufinancovanie projektu (v EUR)	49 758,83
	Co-financing from other Resources (in EUR)
13	Celkové náklady na projekt (v EUR)	159 758,83

Total Project Budget (in EUR)

VV-2018-P2.1		Základné informácie o riešiteľských organizáciách
		Basic information about participating organization
Žiadateľ
Applicant
01	Názov organizácie	Univerzita Komenského v Bratislave Jesseniova lekárska fakulta v Martine
	Name of the organization	Comenius University in Bratislava Xxxxxxxxx Faculty of Medicine in Martin
02	Skrátený názov	JLFUK
	Abbreviation	JFMED CU
03	Adresa organizácie / Address of the Organization	Xxxx Xxxx 00000/0X, 00000 Xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
04	IČO / Organization Identification Number	00000000
05	Právna forma organizácie	Verejnoprávna inštitúcia – Verejná vysoká škola
	Legal form of the Organization	Public institution – Public university
06	Sektor	Sektor vysokých škôl
	Sector	University Sector
07	Platca DPH	Áno/ Yes
	VAT Payer
08	Finančný manažér projektu / Financial Project Manager
	Telefón / Phone
	E-mail
09	Oprávnená osoba na podpis zmluvy v mene žiadateľa / Authorized Person to sign the Contract on behalf of the Applicant
	Telefón / Phone
	E-mail
10	Štatutárny zástupca I / Statutory Representative I
	Telefón / Phone
	Email
11	Štatutárny zástupca II / Statutory Representative II	-
	Telefón / Phone	-
	Email	-

VV-2018-P2.2		Základné informácie o zodpovednom riešiteľovi
		Basic information about the principal investigator
01	Meno a priezvisko, Titul
	Name and Surname, Title
02	Funkcia; pozícia	vedecký pracovník, Vedúca Oddelenia neurovied v patologickej fyziológii
	Funkcion; Position	scientist, Head of the Department of Neuroscience in Pathological Physiology
03	Telefón / Phone
	E-mail
04	Zamestnávateľ / Employer	Univerzita Komenského v Bratislave, Jesseniova lekárska fakulta v Martine / Comenius University in Bratislava, Xxxxxxxxx Faculty of Medicine in Martin
	Address	Xxxx Xxxx 00000/0X, 00000 Xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
	Telefón / Phone
	E-mail
05	Dosiahnuté vzdelanie	PhD
	The highest achieved education	PhD
06	Odborná špecializácia	Biochémia
	Professional Specialisation	Biochemistry
07	Najvýznamnejšie publikácie za posledných 5 rokov alebo ID výskumníka	Structure of vagal afferent nerve terminal fibers in the mouse trachea. Xxxxxx X, Xxxxxxxxxxx X, Xx F, Xxxxx T, Xxxxxxxxxx M, Xxxxxxxxxx X, Tatar M, Xxxxxxxx X., Respir Physiol Neurobiol. 2018 Feb;249:35-46. (citácie: 0) Distinct Expression of Phenotypic Markers in Placodes- and Neural Crest-Derived Afferent Neurons Innervating the Rat Stomach. Xxxxxxxxxx X, Xxxxxxxx E, Xx F, Xxxxx K, Xxxxxxxxxx M, Xxxxx M, Xxxxxxxx X. Dig Dis Sci. 2018 Feb;63(2):383-394. (citácie: 0) The Central Role of Biometals Maintains Oxidative Balance in the Context of Metabolic and Neurodegenerative Disorders. Pokusa M ., Oxid Med Cell Longev. 2017;2017:8210734. (citácie: 0) The expression of receptors for neurotrophins and neurotrophic factors in the vagal and spinal afferent neurons innervating the stomachg in the rat / ... [et al.] In: United European Gastroenterology Journal. - Roč. 3, suppl. 1 (2015), s. A42 GTPase activity regulates kinase activity and cellular phenotypes of Parkinson's disease-associated LRRK2. Biosa A1, Xxxxxxxxxx X, Xxxxxxx L, Xxxxxxx X, Xxxxxxx L, Xxxxxxx E, Xxxxx DJ.; Hum Mol Genet. 2013 Mar 15;22(6):1140-56. (citácie: 48) Title: The Enzymatic Core of the Parkinson's Disease-Associated Protein LRRK2 Impairs
	The most significant publications during last 5 years, or ID of researcher

Mitochondria Biogenesis in Aging Yeast

Author(s): Xxxxxxxxxxxx, A (Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxx, V (Xxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, C (Xxxxxx, Xxxxxx); Xxxxx-Xxxxxxx, S (Xxxxx-Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, L (Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, H (Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxx, W (Xxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, FN (Xxxxxxx, X- Xxxx); Xxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxxx)

Source: FRONTIERS IN MOLECULAR NEUROSCIENCE Volume: 11 Article

Number: 205 Published: JUN 21 2018

Title: Age-related pathology after adenoviral overexpression of the leucine-rich repeat kinase 2 in the mouse striatum

Author(s): Xxxxxxxxxx, A (Xxxxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, B (Ferger, Xxxxx); Xxxxxxxxx, F (Xxxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxxxxxx, B (Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxx, G (Xxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxx, T (Xxxxxxx, Xxxxxx)

Source: NEUROBIOLOGY OF AGING Volume: 66 Pages: 97-111 Published: JUN 2018

Title: New Developments in Genetic rat models of Parkinson's Disease

Author(s): Xxxxx, RB (Xxxxx, Xxxx X.); Xxxxxxxx, MS (Xxxxxxxx, Xxxxxxx S.)

Source: MOVEMENT DISORDERS Volume: 33 Issue: 5 Pages: 717-

729 Published: MAY 2018

Title: Comparative Protein Interaction Network Analysis Identifies Shared and Distinct Functions for the Human ROCO Proteins

Author(s): Xxxxxxx, XX (Xxxxxxx, Xxxxx E.); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, A (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx); Ferrari, R (Ferrari, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, N (Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxxxx)

Source: PROTEOMICS Volume: 18 Issue: 10 Special Issue: SI Article Number:

1700444 Published: MAY 2018

Title: P62/SQSTM1 is a novel leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) substrate that enhances neuronal toxicity

Author(s): Kalogeropulou, AF (Kalogeropulou, Xxxxxx X.); Xxxx, J (Xxxx, Xxxx); Xxxxxxxx, MF (Xxxxxxxx, Xxxx X.); Xxxxx, A (Xxxxx, Xxxx); Xxxxxxxxx, S (Xxxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxx, TP (Xxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxxx H.); Xxxxxxx, HJ (Xxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxx, RJ (Xxxxxxx, X. Xxxxxx)

Source: BIOCHEMICAL JOURNAL Volume: 475 Pages: 1271-1293 Part:

7 Published: APR 16 2018

Title: GTP binding regulates cellular localization of Parkinson's disease-associated LRRK2

Author(s): Xxxxxxx, MB (Xxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxx Xxxxxxx, XX (Xxxx Xxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxx); Xxxx, E (Xxxx, Xxxxx); Xxxxxx-Xxxxx, J (Xxxxxx-Xxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, A (Xxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, M (Xxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxx-Xxxxxx, MC (Xxxxxxxx-Xxxxxx, Xxxxx-Xxxxxxxxx); Xxxxxxx, JM (Xxxxxxx, Xxxx-Xxxx); Xxxxxxx, L (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, E (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxx)

Source: HUMAN MOLECULAR GENETICS Volume: 26 Issue: 14 Pages: 2747- 2767 Published: JUL 15 2017

Title: LRRK2: from kinase to GTPase to microtubules and back

Author(s): Xxxxxxx, MB (Xxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxx, XXX (Xxxx Xxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxx); Xxxx, E (Xxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxx)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 45 Pages: 141-

146 Published: FEB 8 2017,

Title: Mechanisms of LRRK2-dependent neurodegeneration: role of enzymatic activity and protein aggregation

Author(s): Islam, MS (Islam, Md. Xxxxxxxx); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 45 Pages: 163-

172 Published: FEB 8 2017

Title: Effects of LRRK2 Inhibitors on Nigrostriatal Dopaminergic Neurotransmission

Author(s): Xxx, X (Xxx, Xx); Zhi, LT (Xxx, Xxxx-Xxxx); Xx, XT (Xx, Xxxx-Xxxx); Xxx, ZY (Xxx, Xxxx-Xx); Xx, XX (Xx, Xxx-Xxxxx); Xxxxx, H (Xxxxx, Xxx)

Source: CNS NEUROSCIENCE & THERAPEUTICS Volume: 23 Issue: 2 Pages: 162-

173 Published: FEB 2017

Title: Understanding the GTPase Activity of LRRK2: Regulation, Function, and Neurotoxicity

Author(s): Xxxxxx, APT (Xx Xxx Xxxx Xxxxxx); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.)

Edited by: Xxxxxxx HJ

Source: LEUCINE-RICH REPEAT KINASE 2 (LRRK2) Book Series: Advances in Neurobiology Volume: 14 Pages: 71-88 Published: 2017

Title: LRRK2 and the Immune System

Author(s): Xxxxxx, NL (Xxxxxx, Xxxxxxx L.)

Source: LEUCINE-RICH REPEAT KINASE 2 (LRRK2) Book Series: Advances in Neurobiology Volume: 14 Pages: 123-143 Published: 2017

Title: Interaction of LRRK2 and alpha-Synuclein in Parkinson's Disease

Author(s): Daher, JPL (Daher, Xxxx Xxxxx Xxxx)

Source: LEUCINE-RICH REPEAT KINASE 2 (LRRK2) Book Series: Advances in Neurobiology Volume: 14 Pages: 209-226 Published: 2017

Title: Mechanisms of Mutant LRRK2 Neurodegeneration

Author(s): Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.)

Edited by: Xxxxxxx HJ

Source: LEUCINE-RICH REPEAT KINASE 2 (LRRK2) Book Series: Advances in Neurobiology Volume: 14 Pages: 227-Published: 2017

Title: The unconventional G-protein cycle of LRRK2 and Roco proteins

Author(s): Xxxxxxxxx, X (Xxxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxxxx-Xxxxxxxxx, LM (Xxxxxxxxx- Xxxxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxxx, A (Xxxxxxxx, Arjan)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 44 Pages: 1611-

1616 Part: 6 Published: DEC 15 2016

Title: L'RRK de Triomphe: a solution for LRRK2 GTPase activity?

Author(s): Xxxxx-Xxxxx, J (Xxxxx-Xxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, DC (Xxxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, X (Xxxxxx, Xxxxxxx)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 44 Pages: 1625- 1634 DOI: 10.1042/BST20160240 Part: 6 Published: DEC 15 2016

Title: First model of dimeric LRRK2: the challenge of unrevealing the structure of a multidomain Parkinson's-associated protein

Author(s): Xxxxxxxx, X (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx); Gilsbach, BK (Xxxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxxx, F (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxx, Xxxxxxxxx Xxxxxxxx)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 44 Pages: 1635-

Published: DEC 15 2016

Title: Activation of FADD-Dependent Neuronal Death Pathways as a Predictor of Pathogenicity for LRRK2 Mutations

Author(s): Xxxxxxxxxxxx, K (Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxx, E (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxxx); Xxxxxxxxx, PE (Xxxxxxxxx, Polytimi-Eleni); Xxxxx, A (Xxxxx, Xxxx); Xxxxxxxxxxxxx, G (Xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxx, L (Xxxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, HJ (Xxxxxxx, Xxxxx X.)

Source: PLOS ONE Volume: 11 Issue: 11 Article Number: e0166053 Published:

NOV 10 2016

Title: mTOR independent regulation of macroautophagy by Leucine Rich Repeat Kinase 2 via Beclin-1

Author(s): Manzoni, C (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxx, A (Xxxxxx, Xxxxxxxxxx); Xxxxxx, DA (Xxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxx, MPM (Xxxxxx, Xxxx X. X.); Xxxx-Xxxxxxx, H (Plun-Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxxxxxx, R (Xxxxxxxxxxxx, Xxxx); Xxxxx, J (Xxxxx, Xxxx); Xxxxx, SA (Xxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.)

Source: SCIENTIFIC REPORTS Volume: 6 Article Number: 35106 Published: OCT 12 2016

Title: Structural model of the dimeric Parkinson's protein LRRK2 reveals a compact architecture involving distant interdomain contacts

Author(s): Xxxxxxxx, G (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx); Xxxxxxxx, F (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxxxx, BK (Xxxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxx-Xxxxxxxx, Y (Xxxxx-Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, E (Xxxxxxx, Xxxx); Xxxxx, F (Xxxxx, Xxxxxxx); Xx, XX (Xx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxxx, A (Xxxxxxxxx, Xxxx); Xxxxxx, PKA (Xxxxxx, Xxxxxx Xxxxx Xxxxxx); Xxxxx, K (Xxxxx, Xxxxxxx); von Xxxxxxxx, F (xxx Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxxx, K (Xxxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, DD (Xxxxxxx, Xxxxxx D.); Xxx, ZY (Xxx, Xxxxxx); Xxxxxx, A (Xxxxxx, Xxxx); Xxxxxx, N (Xxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, M (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, W (Xxxxxxx, Xxx); Xxxxxxx, M (Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxxxxx-Xxxxxxxx, I (Xxxxxxxxxxx-Xxxxxxxx, Iban); Xxxxxxxx, A (Xxxxxxxx, Arjan); Xxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxx, Xxxxxxxxx Xxxxxxxx)

Source: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA Volume: 113 Issue: 30 Pages: E4357-

E4366 Published: JUL 26 2016

Title: Regulation of LRRK2 promoter activity and gene expression by Sp1

Author(s): Xxxx, XX (Xxxx, Xxxxx); Xxxx, WH (Xxxx, Xxxxxxx)

Source: MOLECULAR BRAIN Volume: 9 Article Number: 33 Published: MAR 22 2016

Title: Protective LRRK2 R1398H Variant Enhances GTPase and Wnt Signaling Activity

Author(s): Xxxxx-Xxxxx, J (Xxxxx-Xxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, DC (Xxxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, S (Xxxxxx, Xxxxxx); Spain, VA (Spain, Xxxxxxxx X.); Blackstone, C (Blackstone,

Xxxxx); Xxxxxx, K (Xxxxxx, Xxxxxxx)

Source: FRONTIERS IN MOLECULAR NEUROSCIENCE Volume: 9 Article Number:

18 Published: MAR 8 2016

Title: The function of orthologues of the human Parkinson's disease gene LRRK2 across species: implications for disease modelling in preclinical research

Author(s): Xxxxxxxx, RG (Xxxxxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxx, IN (Xxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.)

Source: BIOCHEMICAL JOURNAL Volume: 473 Pages: 221-232 Part: 3 Published:

FEB 1 2016

Title: Leucine-Rich Repeat Kinase 2 ( LRRK2) Inhibitors

Author(s): Xxxxxxxx, P (Xxxxxxxx, Xxxx); Xxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxx, Xxxxxx X.); Kormos, BL (Kormos, Xxxxxxx L.); Xxxxx, WD (Xxxxx, Xxxxxx X.)

Source: NOVEL THERAPEUTIC APPROACHES TO THE TREATMENT OF PARKINSON'S

DISEASE: AN OVERVIEW AND UPDATE Book Series: Topics in Medicinal Chemistry Series Volume: 18 Pages: 111-148 Published: 2016

Title: G2385R and I2020T Mutations Increase LRRK2 GTPase Activity

Author(s): Xx, DH (Xx, Xxxx Xxxx); Xxxx, J (Xxxx, Xxxxxx); Xxx, EH (Xxx, Xxx-Xxx); Xxx, I (Xxx, Xxxxxx); Xxx, H (Xxx, Xxxxxxxx); Xxxx, W (Xxxx, Xxxxx)

Source: BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL Article Number: 7917128 Published:

2016

Title: Activation Mechanism of LRRK2 and Its Cellular Functions in Parkinson's Disease Author(s): Xxxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx X.); Xxxxxxxx, A (Xxxxxxxx, Xxxxx) Source: PARKINSONS DISEASE Article Number: 7351985 Published: 2016

Title: Decoding Parkinson's Disease Pathogenesis: The Role of Deregulated mRNA Translation

Author(s): Xxxxxx, X (Xxxxxx, Xxx)

Source: JOURNAL OF PARKINSONS DISEASE Volume: 6 Issue:

1 Pages: 17-27 Published: 2016

Title: Neurite Aggregation and Calcium Dysfunction in iPSC-Derived Sensory Neurons with Parkinson's Disease-Related LRRK2 G2019S Mutation

Author(s): Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx J.); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.)

Source: STEM CELL REPORTS Volume: 5 Issue: 6 Pages: 1039-1052 Published: DEC 8

2015

Title: Leucine-rich repeat kinase 2 interacts with p21-activated kinase 6 to control neurite complexity in mammalian brain

Author(s): Xxxxxxx, L (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, MD (Cirnaru, Xxxxx Xxxxxxx); Xxxxxxx, A (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxxx, U (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxx, I (Xxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxx, E (Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxxxx, E (Xxxxxxxxxx, Evy); Xxxxxxxx, L (Xxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxxxx, G (Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.); Xxx xxx Xxxxx, C (Xxx xxx Xxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxxxx, V (Xxxxxxxxxx, Xxxxxx); Bandopadhyay, R (Bandopadhyay, Xxxx); Xxxxxxx, L (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, G (Xxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.); Xxxxxxx, JM (Xxxxxxx, Xxxx-Xxxx); Xxxxxxx, E (Xxxxxxx, Xxxxx)

Source: JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY Volume: 135 Issue: 6 Pages: 1242- 1256 Published: DEC 2015

Title: The Parkinson's Disease-Associated Protein Kinase LRRK2 Modulates Notch Signaling through the Endosomal Pathway

Author(s): Xxxx, Y (Xxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxxx, Y (Xxxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxxx, T (Xxxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxx, HR (Xxxx, Xxxxxxx); Xxxxx, T (Xxxxx, Xxxx); Xxxxxx, K (Xxxxxx, Xxxxx); Xxxxx, T (Xxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, K (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxx-Xxxxx); Matsumoto, G (Matsumoto, Gen); Xxxxxxx, T (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxxxx, R (Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxxxx, H (Xxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxx, G (Xxxxx, Go); Xxxxxx, N (Xxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxx, N (Xxxxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxxx, R (Xxxxxxxxx, Ryosuke)

Source: PLOS GENETICS Volume: 11 Issue: 9 Article Number: e1005503 Published:

SEP 2015

Title: Alterations in late endocytic trafficking related to the pathobiology of LRRK2-linked Parkinson's disease

Author(s): Xxxxxx-Xxxx, P (Xxxxxx-Xxxx, Xxxxx); Xxxxx-Xxxxx, P (Xxxxx-Xxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxxx, B (Xxxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxx-Xxxxx, J (Xxxxxx-Xxxxx, Xxxxx); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx J.); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxxx, X (Xxxxxxxx, Xxxxxx)

Source: BIOCHEMICAL SOCIETY TRANSACTIONS Volume: 43 Pages: 390-

395 Published: JUN 2015

Title: Adenoviral-mediated expression of G2019S LRRK2 induces striatal pathology in a kinase- dependent manner in a rat model of Parkinson's disease

Author(s): Xxxxx, X (Xxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, APT (An Phu Xxxx Xxxxxx); Xxxxxxxxx, J (Xxxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxx, P (Xxxxx, Xxxxxxxx); Xxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.)

Source: NEUROBIOLOGY OF DISEASE Volume: 77 Pages: 49-61 Published: MAY 2015

Title: Neural stem cells in Parkinson's disease: a role for neurogenesis defects in onset and progression

Author(s): Le Grand, JN (Le Grand, Xxxxxx Xxxxxx); Xxxxxxxx-Xxxx, L (Xxxxxxxx-Xxxx, Xxxxx); Xxxxxx, MA (Xxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx); Xxxxxxxxxx, JC (Xxxxxxxxxx, Xxxx X.)

Source: CELLULAR AND MOLECULAR LIFE SCIENCES Volume: 72 Issue: 4 Pages: 773- 797 DOI: 10.1007/s00018-014-1774-1 Published: FEB 2015

Accession Number: WOS:000348918500008

PubMed ID: 25403878 ISSN: 1420-682X eISSN: 1420-9071

Title: Novel LRRK2 GTP-binding inhibitors reduced degeneration in Parkinson's disease cell and mouse models

Author(s): Xx, TX (Xx, Xxxxxxx); Xxxx, DJ (Xxxx, Xxxxx); Xxxxx, SJ (Xxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx X.); Xxx, FT (Xxx, Xxxxxxxx); Xxx, JN (Xxx, Xxxxxxx); Xxxx, LB (Xxxx, Xxxxxx); Xxxxxxxx, P (Xxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, HE (Xxxxxx, Xxxxx X.); Xxxx, JS (Xxxx, Xxx-Xxxx); XxxXxxxxx, AD (XxxXxxxxx, Xxxxxxxxx X., Xx.); Xxxxx, WW (Xxxxx, Xxxxx X.)

Source: HUMAN MOLECULAR GENETICS Volume: 23 Issue: 23 Pages: 6212- 6222 Published: DEC 1 2014

Title: LRRK2 pathobiology in Parkinson's disease

Author(s): Xxxxxx, X (Xxxxxx, Xxx); Xxx, XX (Xxx, Xxxxxxx Xxxx); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxx X.)

Source: JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY Volume: 131 Issue: 5 Pages: 554-

565 Published: DEC 2014

Title: LRRK2, a puzzling protein: Insights into Parkinson's disease pathogenesis

Author(s): Xxxxxxx, XX (Xxxxxxx, X. Xxxxxx); Xxxxxxxx, RH (Xxxxxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxx, XX (Xxxxxxx, Xxxxxx X.)

Source: EXPERIMENTAL NEUROLOGY Volume: 261 Pages: 206-216 Published: NOV 2014

Title: Conditional expression of Parkinson's disease-related R1441C LRRK2 in midbrain dopaminergic neurons of mice causes nuclear abnormalities without neurodegeneration

Author(s): Xxxxx, X (Xxxxx, Elpida); Xxxxxx, M (Xxxxxx, Xxxxxx); Foo, CSY (Foo, Xxxxxxxx Xxx-Yan); Xxxxxxx, D (Xxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxxx, L (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxx); Xxxxxx, D (Xxxxxx, Xxxxxx); Xxxxx, GW (Xxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxx X.); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.)

Source: NEUROBIOLOGY OF DISEASE Volume: 71 Pages: 345-358 Published: NOV 2014

Title: Heterogeneity of Leucine-Rich Repeat Kinase 2 Mutations: Genetics, Mechanisms and Therapeutic Implications

Author(s): Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxx, M (Xxxxxxx, Xxxx X.)

Source: NEUROTHERAPEUTICS Volume: 11 Issue: 4 Pages: 738-750 Published: OCT 2014

Title: A Parkinson's disease gene regulatory network identifies the signaling protein RGS2 as a modulator of LRRK2 activity and neuronal toxicity

Author(s): Xxxxxxxxx, J (Xxxxxxxxx, Xxxxxx); Xx, H (Xx, Xx); Xxxxxxxx, M (Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxx, M (Xxx, Min); Stafa, K (Stafa, Klodjan); Xxxxxxxx, CD (Xxxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxxx); Xxxx, JY (Xxxx, Xxxx X.); Xxxx, S (Xxxx, Shamol); Xxxxxxx, L (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxx, A (Xxxxxx, Xxxxxxxxxx); Xxxxx, A (Xxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxx, KL (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx X.); Xxx, XX (Xxx, XxXxx); Xxxxxxxxx, XX (Xxxxxxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxxxx, P (Xxxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxx, XX (Xxx, Xxxxxx); Bandopadhyay, R (Bandopadhyay, Xxxx); Xxxxxxxxx, MA (Xxxxxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxxx, XX (Xxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxxxxx)

Source: HUMAN MOLECULAR GENETICS Volume: 23 Issue: 18 Pages: 4887- 4905 Published: SEP 15 2014

Title: Arsenite Stress Down-regulates Phosphorylation and 14-3-3 Binding of Leucine-rich Repeat Kinase 2 (LRRK2), Promoting Self-association and Cellular Redistribution

Author(s): Xxxxxx, A (Mamais, Xxxxxxxxxx); Xxxx, R (Xxxx, Xxxx); Xxxxxxx, A (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxxx, DN (Xxxxxx, Xxxxx X.); Xxxx, X (Xxxx, Xxxxxxxxx); Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxx, MR (Xxxxxxx, Xxxx X.); Bandopadhyay, R (Bandopadhyay, Rina)

Source: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Volume: 289 Issue: 31 Pages: 21386-

21400 Published: AUG 1 2014

		Title: Genetic, Structural, and Molecular Insights into the Function of Ras of Complex Proteins Domains
		Author(s): Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxxx, S (Xxxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxx, PA (Xxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxx)
		Source: CHEMISTRY & BIOLOGY Volume: 21 Issue: 7 Pages: 809-818 Published: JUL 17 2014 Title: LRRK2 kinase activity and biology are not uniformly predicted by its autophosphorylation and cellular phosphorylation site status Author(s): Xxxxxxxx, A (Xxxxxxxx, Xxxxx); Xxxxxxx, EA (Xxxxxxx, Xxxxxxxxx X.); Xxxxxx, SM (Xxxxxx, Xxxxx X.); Lebakken, CS (Xxxxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxxx, RJ (Xxxxxxx, X. Xxxxxx) Source: FRONTIERS IN MOLECULAR NEUROSCIENCE Volume: 7 Article Number: 54 Published: JUN 24 2014 Title: Structural biology of the LRRK2 GTPase and kinase domains: implications for regulation Author(s): Gilsbach, BK (Xxxxxxxx, Xxxxx X.); Xxxxxxxx, X (Xxxxxxxx, Xxxxx) Source: FRONTIERS IN MOLECULAR NEUROSCIENCE Volume: 7 Article Number: 32 Published: MAY 5 2014 Title: Functional interaction of Parkinsons disease-associated LRRK2 with members of the dynamin GTPase superfamily Author(s): Xxxxx, X (Stafa, Xxxxxxx); Xxxxx, E (Xxxxx, Xxxxxx); Xxxxx, R (Xxxxx, Xxxxx); Xxxxx, A (Xxxxx, Xxxxxxxxxx); Xxxxxxx, X (Xxxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxx, A (Xxxxx, Xxx); Xxxxxx, S (Xxxxxx, Xxxxxx); Xxxxx, YL (Xxxxx, Xxxxx); Bandopadhyay, R (Bandopadhyay, Xxxx); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, XX (Xxxxxx, Xxx X.); Xxxxx, DJ (Xxxxx, Xxxxxx X.) Source: HUMAN MOLECULAR GENETICS Volume: 23 Issue: 8 Pages: 2055- 2077 Published: APR 15 2014 Title: Prediction of the Repeat Domain Structures and Impact of Parkinsonism-Associated Variations on Structure and Function of all Functional Domains of Leucine-Rich Repeat Kinase 2 (LRRK2) Author(s): Xxxxx, RD (Xxxxx, Xxxx X.); Xxxxxxx, TD (Xxxxxxx, Xxxxxxxx D.); Xxx, F (Xxx, Xxx); Xxxxxxxx, JG (Xxxxxxxx, Xxxxxxx X.); Xxxxx, HC (Xxxxx, Xxxxx-Xxxx) Source: HUMAN MUTATION Volume: 35 Issue: 4 Pages: 395-412 Published: APR 2014 Title: A continuous and direct assay to monitor leucine-rich repeat kinase 2 activity Author(s): Xxxxx, XX (Xxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxxxxx, KF (Xxxxxxxxx, Kieran F.); Xxx, XY (Xxx, Xiayang); Xxxxxxxxx, A (Xxxxxxxxx, Xxx) Source: ANALYTICAL BIOCHEMISTRY Volume: 450 Pages: 63-69 Published: APR 1 2014 Title: Differential Effects of Familial Parkinson Mutations in LRRK2 Revealed by a Systematic Analysis of Autophosphorylation Author(s): Xxxxxxxxxx, S (Xxxxxxxxxx, Xxxxx); Xxx, G (Xxx, Xxxxx); Xxxx, T (Xxxx, Tomoko); Xxxxxxxx, T (Xxxxxxxx, Xxxxxxx) Source: BIOCHEMISTRY Volume: 52 Issue: 35 Pages: 6052-6062 Published: SEP 3 2013 Title: LRRK2: an eminence grise of Wnt-mediated neurogenesis? Author(s): Xxxxxxx, DC (Xxxxxxx, Xxxxxx X.); Xxxxxx, X (Xxxxxx, Xxxxxxx) Source: FRONTIERS IN CELLULAR NEUROSCIENCE Volume: 7 Article Number: 82 Published: MAY 31 2013 Title: Unlocking the secrets of LRRK2 function with selective kinase inhibitors Author(s): Xxxxxx, N (Xxxxxx, Xxxxxxx); Xxxxxxxx, GM (Xxxxxxxx, Xxxxxx X.) Source: FUTURE NEUROLOGY Volume: 8 Issue: 3 Pages: 347-357 Published: MAY 2013
08	Prehľad projektov zodpovedného riešiteľa v oblasti výskumu a vývoja v doméne zdravotníctva	APV-15-0163: zodpovedný riešiteľ, Analýza nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť pomocou optogenetických metód a multifotónovej mikroskopie. Rozpočet: 74 300,00Eur, Realizácia: 2016- 2019 V tomto projekte sme sa zamerali na molekulárne zmeny nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť. cZistili sme, že i) nociceptory embryonicky odvodené z neurálnej lišty sú zakončené v mukóze, a primárne exprimujú receptory pre snímanie noxických stimulov v lumene, ii) nociceptory odvodené z plakód, inervujú hlbšie vrstvy, (submukóza a cirkulárny sval) a snímajú prostredia vnútorného tkaniva iii) nociceptory odvodené z neurálnej lišty sa rozvetvujú do myenterického plexu kde modulujú funkciu myenterických neurónov. VEGA 1/0334/18: spoluriešiteľ/zástupca, Analýza časovej závislosti
	List of projects of the principal investigator in R&D in the domain of health

		patogenézy Parkinsonovej choroby v periférnom a centrálnom nervovom systéme. Rozpočet: 39 081,00Eur, Realizácia: 2018-2020. Začiatok tohto projektu sa datuje k aktuálnemu roku, preto v tomto prípade nemáme ešte releventné výsledky. Cieľom tohto projektu je zavedenie myšieho modelu PCH, s patológiou začínajúcou v tkanivách tráviaceho traktu a pokračujúcou do CNS. Tento fenotyp budeme indukovať orálnou alebo subkutánnou aplikáciou Rotenónu. Hlavným zámerom predkladaného projektu je získanie doplňujúcich, avšak kľúčových informácií o priebehu patogenézy PD z časového a anatomického pohľadu u rotenónom indukovanom myšacom modeli ochorenia. Pridanou hodnotou projektu je neštandardný uhol pohľadu zameraný na periférny nervový systém. VEGA 1/0067/14: spoluriešiteľ, Mechanizmy neurogénnej dysfunkcie dolných močových ciest - základné a klinické štúdie, Rozpočet: 27 000,00EUR, Realizácia: 2014-2017. Zistili sme, že mechanická hyperaktivita mechúra pri poškodení miechy vyvoláva výrazné zmeny v expresii mnohých neurotrofických faktorov (NGF, GDNF, BDNF) v močovom mechúre a ich receptorov v aferentných nervoch mechúra. APV-15-0163: principal investigator, Analysis of nerve terminals mediating visceral pain by optogenetic strategies and multiphoton imaging. Budget: 74 300,00Eur; Realization: 2016-2019. In this project, we focused on molecular changes of nerve terminals mediating the visceral pain. We have found that i) nociceptors embryonically derived from neural crest terminate in the mucosa and primarily express receptors for sensing noxious stimuli in the lumen, ii) nociceptors derived from placodes innervate deeper layers (submucosa and circular muscle) and sense inner tissue environment iii) neural crest-derived nociceptors also branch into myenteric plexus modulating the function of intrinsic myenteric neurons. VEGA 1/0334/18: representative of principal investigator/co- investigator, Time correlation of Parkinson´s disease pathogenesis in peripheral and central nervous system. Budget: 39 081,00Eur; Realization: 2018-2020. The start of this project dates back to the current year, so we do not have any relevant results yet. The aim of this project is to introduce a mouse model of PD, with a pathology starting in the tissues of the digestive tract and progressing to the CNS. This phenotype will be induced by oral or subcutaneous administration of Xxxxxxxx. The main aim of the presented project is to obtain supplementary but crucial information on PD pathogenesis in terms of time course and anatomy in rotenone-induced mouse model of the disease. VEGA 1/0067/14: co-investigator, Mechanisms of neurogenic dysfunction of the lower urinary tract - basic and clinical studies. Budget: 27 000,00EUR, Realization: 2014-2017. We found out that mechanical bladder overactivity in spinal cord injury causes significant changes in the expression of many neurotrophic factors (NGF, GDNF, BDNF) in the bladder and their receptors in the afferent bladder nerves.
09	Počet – Projekty zodpovedného riešiteľa realizované v priebehu posledných 5 rokov	3
	Number – Projects of the principal investigator executed during the last 5 years

10	Celková citovanosť v SCI / ISI	421
	Total number of citations in SCI / ISI database

VV-2018-P2.3		Základné informácie o zástupcovi zodpovedného riešiteľa
		Basic information about the representative of the principal investigator
01	Meno a priezvisko, Titul
	Name and Surname, Title
02	Funkcia; pozícia	Vedecký pracovník
	Funkcion; Position	scientist
03	Telefón / Phone
	E-mail
04	Zamestnávateľ / Employer	Univerzita Komenského v Bratislave, Jesseniova lekárska fakulta v Martine / Comenius University in Bratislava, Xxxxxxxxx Faculty of Medicine in Martin
	Address	Xxxx Xxxx 00000/0X, 00000 Xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
	Telefón / Phone
	E-mail
05	Dosiahnuté vzdelanie	PhD
	The highest achieved education	PhD
06	Odborná špecializácia	Biochémia
	Professional Specialisation	Biochemistry
	Najvýznamnejšie publikácie za posledných 5 rokov alebo ID výskumníka	The Central Role of Biometals Maintains Oxidative Balance in the Context of Metabolic and Neurodegenerative Disorders. Pokusa M, Xxxxxxx Xxxxxxxxxx X., Oxid Med Cell Longev. 2017 ;2017:8210734. (citácie: 0)
				Adipogenesis and aldosterone: a study in lean tryptophan-depleted rats. Pokusa M1, Hlavacova N, Xxxxxxx A, Xxxxxxxx M, Xxxxx S, Xxxxxx X.; Gen Physiol Biophys. 2016 Jul;35(3):379-86. (citácie: 2) Increased gene expression of selected vesicular and glial glutamate transporters in the frontal cortex in rats exposed to voluntary wheel running. By: Xxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; Xxxxxx, X., JOURNAL OF PHYSIOLOGY AND PHARMACOLOGY Volume: 68 Issue: 5 Pages: 709-714 Published: OCT 2017
07	The most significant publications during last 5 years, or ID of researcher	Aldosterone concentrations in saliva reflect the duration and severity of depressive episode in a sex dependent manner By: Segeda, V.; Xxxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; et al., JOURNAL OF PSYCHIATRIC RESEARCH Volume: 91 Pages: 164-168 Published: AUG 2017
		Aldosterone Signals the Onset of Depressive Behaviour in a Female Rat Model of Depression along with SSRI Treatment Resistance. Franklin M1, Hlavacova N, Xxxxx X, Xxxxxx M, Xxxxxxxx X, Xxxxxx X.; Neuroendocrinology. 2015;102(4):274-287. (citácie: 10) Kynurenine pathway in depression: A systematic review and meta-analysis. By: Xxxx, Xxxxxx; Xxxx, Xxxxxxxxx; Xxxx, Xxxxxxxxx; et al., NEUROSCIENCE AND BIOBEHAVIORAL REVIEWS Volume: 90 Pages: 16-25 Published: JUL 2018 Effects of vortioxetine on biomarkers associated with glutamatergic activity in an SSRI insensitive model of depression in female rats By: Xxxxxxxxx, X.; Xx, X.; Xxxxxxx, X.; et al., PROGRESS IN NEURO-PSYCHOPHARMACOLOGY & BIOLOGICAL PSYCHIATRY Volume: 82 Pages: 332-338 Published: MAR 2 2018 Reprint of: Contrasting effects of vortioxetine and paroxetine on pineal gland biochemistry in a tryptophan-depletion model of depression in female rats. By: Xxxxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; Xx, X.; et al., PROGRESS IN NEURO-PSYCHOPHARMACOLOGY & BIOLOGICAL PSYCHIATRY Volume:

		82 Pages: 339-342 Published: MAR 2 2018 Contrasting effects of vortioxetine and paroxetine on pineal gland biochemistry in a tryptophan- depletion model of depression in female rats. By: Xxxxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; Xx, X.; et al., PROGRESS IN NEURO-PSYCHOPHARMACOLOGY & BIOLOGICAL PSYCHIATRY Volume: 79 Pages: 499-502 Part: B Published: OCT 3 2017 The renin-angiotensin system: a possible new target for depression. By: Xxxx, Xxxx; Xxxxxxx, Xxxxx; Xxxxxxxxx, Xxxxxx; et al., BMC MEDICINE Volume: 15 Article Number: 144 Published: AUG 1 2017 Aldosterone concentrations in saliva reflect the duration and severity of depressive episode in a sex dependent manner. By: Xxxxxx, X.; Xxxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; et al., JOURNAL OF PSYCHIATRIC RESEARCH Volume: 91 Pages: 164-168 Published: AUG 2017 Effect of Physical Exercise and Acute Escitalopram on the Excitability of Brain Monoamine Neurons: In Vivo Electrophysiological Study in Rats. By: Xxxxxxxxx, Xxxxxxx; Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx; Xxxxxxxx, Xxxxxxx; et al., INTERNATIONAL JOURNAL OF NEUROPSYCHOPHARMACOLOGY Volume: 20 Issue: 7 Pages: 585-592 Published: JUL 2017 Aldosterone Action on Brain and Behavior. By: Xxxxx, Xxxxxx, HORMONES, BRAIN AND BEHAVIOR, VOL 3: MOLECULAR AND CELLULAR MECHANISMS, 3RD EDITION Pages: 159-179 Published: 2017 (3)-Adrenergic receptors, adipokines and neuroendocrine activation during stress induced by repeated immune challenge in male and female rats. By: Xxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxx, Xxxxxxxxxx; et al., STRESS-THE INTERNATIONAL JOURNAL ON THE BIOLOGY OF STRESS Volume: 20 Issue: 3 Pages: 294-302 Published: 2017 Adipogenesis and aldosterone: a study in lean tryptophan-depleted rats. By: Xxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxx, Xxxxxx; et al., GENERAL PHYSIOLOGY AND BIOPHYSICS Volume: 35 Issue: 3 Pages: 379-386 Published: JUL 2016 Effect of blockade of mGluR5 on stress hormone release and its gene expression in the adrenal gland. Pokusa M, Prokopova B, Xxxxxxxxx N, Xxxxxxxxx X, Xxxxxx X.; Can J Physiol Pharmacol. 2014 Aug;92(8):686-92. (citácie: 9) Intranasal Oxytocin Attenuates Reactive and Ongoing, Chronic Pain in a Model of Mild Traumatic Brain Injury. By: Xxxxxxx, Xxxxxx X.; Xxxxxxxxx, Xxxxxxx; Xxxxxxxx, Xxxxxxx; et al., HEADACHE Volume: 58 Issue: 4 Pages: 545-558 Published: APR 2018 Oxytocin Receptor Antagonist (Atosiban) in the Threat of Preterm Birth: Does It Have Any Effect on Breastfeeding in the Term Newborn? By: Xxxxx, Xxxxx Xxxxx; Xxxxx Xxxxxxx, Xxxxxx X.; Xxxxxxx, Xxxxxx; et al., Early Access: XXX 2018 The hemoglobin derived peptide LVV-hemorphin-7 evokes behavioral effects mediated by oxytocin receptors. By: xx Xxxx, Xxxxxx Xxxx; Xxxxxxx, Xxxxxxx Xxxxxxx; Xxxxxxx-Xxxxx, Xxxxxxx; et al., NEUROPEPTIDES Volume: 66 Pages: 59-68 Published: DEC 2017 Increased gene expression of selected vesicular and glial glutamate transporters in the frontal cortex in rats exposed to voluntary wheel running , Xxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, N.; Xxxxxx, X., JOURNAL OF PHYSIOLOGY AND PHARMACOLOGY Volume: 68 Issue: 5 Pages: 709-714 Published: OCT 2017 Dissociation of adrenocorticotropin and corticosterone as well as aldosterone secretion during stress of hypoglycemia in vasopressin-deficient rats. By: Xxxxx, Xxxxx; Xxxxxxxx, Xxxxxxxx; Xxxxxx, Xxxxxxxxx X.; et al., LIFE SCIENCES Volume: 166 Pages: 66-74 Published: DEC 1 2016 Adipogenesis and aldosterone: a study in lean tryptophan-depleted rats. Xxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxx, Xxxxxx; et al. GENERAL PHYSIOLOGY AND BIOPHYSICS Volume: 35 Issue: 3 Pages: 379-386 Published: JUL 2016 Blood Pressure Regulation in Stress: Focus on Nitric Oxide-Dependent Mechanisms. By: Xxxxxxxxx, X.; Xxxxxxxxx, X., PHYSIOLOGICAL RESEARCH Volume: 65 Supplement: 3 Pages: S309- S342 Published: 2016 Molecular changes induced by repeated restraint stress in the heart: the effect of oxytocin receptor antagonist atosiban. By: Xxxxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxxx, Xxxxxxxx; Xxxxxx, Xxxxxx; et al., CANADIAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY AND PHARMACOLOGY Volume: 93 Issue: 9 Pages: 827-834 Published: SEP 2015 Initial study on the possible mechanisms involved in the effects of high doses of perfluorooctane sulfonate (PFOS) on prolactin secretion. By: Xxxxxxx, X.; Xxxxxxx, X.; Xxxxx-Xxxxx, X.; et al., FOOD AND CHEMICAL TOXICOLOGY Volume: 83 Pages: 10-16 Published: SEP 2015 Molecular changes induced by repeated restraint stress in the heart: the effect of oxytocin receptor antagonist xxxxxxxx. Xxxxxxxxx M1,2, Barancik M, Xxxxxx M, Prokopova B, Radosinska J, Xxxxxx X, Xxxxxx X, Xxxxxx X.; Can J Physiol Pharmacol. 2015 Sep;93(9):827-34. (citácie: 1) RISK pathway is involved in oxytocin postconditioning in isolated rat heart. Xxxxxxxxx, Xxxxxx; Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx; Xxxxx, Xxxxx; et al., PEPTIDES Volume: 86 Pages: 55-62 Published: DEC 2016
08	Prehľad projektov zodpovedného riešiteľa v oblasti výskumu a vývoja	VEGA 1/0334/18: zodpovedný riešiteľ, Analýza časovej závislosti patogenézy Parkinsonovej choroby v periférnom a centrálnom

	v doméne zdravotníctva	nervovom systéme. Rozpočet: 13 027,00Eur, Realizácia: 2018-2020 Začiatok tohto projektu sa datuje k aktuálnemu roku, preto v tomto prípade nemáme ešte releventné výsledky. Cieľom tohto projektu je zavedenie myšieho modelu PCH, s patológiou začínajúcou v tkanivách tráviaceho traktu a pokračujúcou do CNS. Tento fenotyp budeme indukovať orálnou alebo subkutánnou aplikáciou Rotenónu. Hlavným zámerom predkladaného projektu je získanie doplňujúcich, avšak kľúčových informácií o priebehu patogenézy PD z časového a anatomického pohľadu u rotenónom indukovanom myšacom modeli ochorenia. Pridanou hodnotou projektu je neštandardný uhol pohľadu zameraný na periférny nervový systém.
	List of projects of the principal investigator in R&D in the domain of health		Grant UK/17/2017: zodpovedný riešiteľ, Optimalizácia mikroskopickej metódy FLIM pre štúdium skorých faktorov podieľajúcich sa na patogenéze Parkinsonovej choroby v bunkovom modeli. Rozpočet: 1 000,00Eur; Realizácia: 2017 Téma, ktorou sme sa rozhodli v rámci nášho projektu zaoberať nebola doposiaľ na našom pracovisku riešená. Cieľom projektu bolo zaviesť a optimalizovať FLIM (fluorescence lifetime imaging) metódu pre štúdium skorých zmien podieľajúcich sa na patogenéze PCH. Pri tejto pilotnej štú sme sa sústredili na jednochý model, a to neuronálnu bunkovú líniu SH- SY5Y. Parkinsonický fenotyp (agregáciu αS) sme indukovali pomocou Rotenónu. Používali sme veľmi nízke koncentrácie Rotenónu (5-100nM). Zistili sme, že pri koncentrácii 10nM/24h dochádza k postupnej tvorbe agregátov αS, avšak táto koncentráia ešte nie je toxická pre bunku. Prítomnosť agregátov αS, sme detegovali štandardnými metódami i) imunocytochemické farbenie pomocou protilátok proti αS ii) farbením živých buniek fluorescenčnou permeabilnou próbou ThS. Tieto skutočnos sme korelovali so zmenou životnosti fluorescencie endogénneho NADH. Zistili sme že i) vplyvom Rotenónu, dochádza k predĺženiu životnosti NADH, pričom tento signál sme detegovali v blízkosti mitochondriálnej siete, ii) aj v prípade farbenia živých buniek ThS, dochádza k zmene životnosti ThS v závislosti od stúpajúcej koncentrácie Rotenónu a výskyt agregátov αS
		APV-15-0163: spoluriešiteľ, Analýza nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť pomocou optogenetických metód a multifotónovej mikroskopie. Rotpočet: 74 300,00Eur, Realizácia: 2016- 2019. V tomto projekte sme sa zamerali na molekulárne zmeny nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť. cZistili sme, že i) nociceptory embryonicky odvodené z neurálnej lišty sú zakončené v mukóze, a primárne exprimujú receptory pre snímanie noxických stimulov v lumene, ii) nociceptory odvodené z plakód, inervujú hlbšie vrstvy, (submukóza a cirkulárny sval) a snímajú prostredia vnútorného tkaniva iii) nociceptory odvodené z neurálnej lišty sa rozvetvujú do myenterického plexu kde modulujú funkciu myenterických neurónov.
		VEGA 1/0067/14: spoluriešiteľ, Mechanizmy neurogénnej dysfunkcie dolných močových ciest – základné a klinické štúdie. Rozpočet: 27 000,00EUR, Realizácia: 2014-2017. Zistili sme, že mechanická hyperaktivita mechúra pri poškodení miechy vyvoláva výrazné zmeny v expresii mnohých neurotrofických faktorov (NGF, GDNF, BDNF) v močovom mechúre a ich receptorov v aferentných nervoch mechúra.
		VEGA 1/0334/18: principal investigator, Time correlation of Parkinson´s disease pathogenesis in peripheral and central nervous system. Budget: 39 081,00Eur; Realization: 2018-2020. The start of this project dates back to the current year, so we do not

		have any relevant results yet. The aim of this project is to introduce a mouse model of PD, with a pathology starting in the tissues of the digestive tract and progressing to the CNS. This phenotype will be induced by oral or subcutaneous administration of Xxxxxxxx. The main aim of the presented project is to obtain supplementary but crucial information on PD pathogenesis in terms of time course and anatomy in rotenone-induced mouse model of the disease. Grant UK/17/2017: principal investigator, Optimization of the FLIM microscopic method for the study of early factors involved in the pathogenesis of Parkinson's disease in the cell model. Budget: 1 000,00Eur; Realization: 2017. The topic we have chosen to address in our project has not yet been addressed at our department. The goal of the project was to introduce and optimize the FLIM (fluorescence lifetime imaging) method for investigation of early changes involved in the pathogenesis of PD. In this pilot study, we focused on a simple model, the neural cell line SH- SY5Y. Parkinsonian phenotype (aggregation of αS) was induced by Xxxxxxxx. We used very low Rotenone concentrations (5-100nM). We found that at a concentration of 10nM / 24h, the αS aggregates were sequentially generated, but this concentration was not yet toxic to the cell. The presence of αS aggregates, we have detected by standard methods i) immunocytochemical staining using anti- αS antibodies; ii) staining of living cells with ThS, a fluorescent permeable probe. This findings we have correlated with a change in endogenous NADH fluorescence lifetime. We found that i) due to Rotenone treatment, the NADH fluorescence lifetime of is prolonged, while detecting this signal near the mitochondrial network, ii) depending on the Rotenone concentration and the occurrence of αS aggregates. APV-15-0163: co-investigator, Analysis of nerve terminals mediating visceral pain by optogenetic strategies and multiphoton imaging. Budget: 74 300,00Eur; Realization: 2016-2019. In this project, we focused on molecular changes of nerve terminals mediating the visceral pain. We have found that i) nociceptors embryonically derived from neural crest terminate in the mucosa and primarily express receptors for sensing noxious stimuli in the lumen, ii) nociceptors derived from placodes innervate deeper layers (submucosa and circular muscle) and sense inner tissue environment iii) neural crest-derived nociceptors also branch into myenteric plexus modulating the function of intrinsic myenteric neurons. VEGA 1/0067/14: co-investigator, Mechanisms of neurogenic dysfunction of the lower urinary tract - basic and clinical studies. Budget: 27 000,00EUR, Realization: 2014-2017. We found out that mechanical bladder overactivity in spinal cord injury causes significant changes in the expression of many neurotrophic factor (NGF, GDNF, BDNF) in the bladder and their receptors in the afferent bladder nerves.
09	Počet – Projekty zodpovedného riešiteľa realizované v priebehu posledných 5 rokov	3
	Number – Projects of the principal investigator executed during the last 5 years	3
10	Celková citovanosť v SCI / ISI	33
	Total number of citations in SCI / ISI database

VV-2018-P2.4		Základné informácie o spoluriešiteľských organizáciách (Je potrebné vyplniť za každú organizáciu zvlášť)
		Basic information about co-operative organizations (To be filled in for each organization separately)
Spoluriešiteľská organizácia
Cooperating organization
01	Názov organizácie	Na projekte neparticipuje spoluriešiteľ.
	Name of the Organization	-
02	Skrátený názov	-
	Abbreviation	-
03	Adresa organizácie / Adress of the Organization	-
04	IČO / Organization Identification Number	-
05	Právna forma organizácie	-
	Legal form of the Organization	-
06	Sektor	-
	Sector	-
07	Platca DPH	-
	VAT Payer
08	Oprávnená osoba na podpis zmluvy v mene žiadateľa / Authorized person to sign the Contract on behalf of the Applicant for reserach grant	-
	Telefón / Phone	-
	E-mail	-
09	Štatutárny zástupca I / Statutory Representative I	-
	Telefón / Phone	-
	Email	-
10	Štatutárny zástupca II / Statutory Representative II	-
	Telefón / Phone	-
	Email	-

VV-2018-P2.5			Zoznam riešiteľov
			List of Participants
01	Zoznam zamestnancov priamo sa podieľajúcich na riešení projektu
	List of staff directly involved in the Project
Meno a priezvisko	Tituly	Pracovné zaradenie	Dátum narodenia	IČO organizácie	Počet hodín	Počet hodín v rokoch
Name and Surname	Titles	Job / Position	Date of Birth	Organizatio n Identificatio n Number	Hours	Hours in years
				00397865	200 (2018) 1500 (2019) 1500 (2020)	3200
				00397865	200 (2018) 1500 (2019) 1500 (2020)	3200
				00397865	200 (2018) 1500 (2019) 1500 (2020)	3200
				00397865	100 (2018) 1000 (2019) 1000 (2020)	2200
				00397865	200 (2018) 1500 (2019) 1500 (2020)	3200
				00397865	50 (2018) 500 (2019) 500 (2020)	1050

VV-2018-P2.5			Zoznam riešiteľov
			List of Participants
02	Ostatní zamestnanci / Other staff	Celkový počet ostatných osôb	2
		Total number of other staff
		Súhrnná kapacita ostatných osôb v hodinách	300
		Total capacity of other staff in hours
03	Spolu / In total	Celkový počet zamestnancov	8
		Total number of the employed staff
		Súhrnná kapacita zamestnancov v hodinách	16 350
		Total capacity of the employed staff in hours

VV-2018-P2.6		Projektový manažér / Vedúci projektu (Kontaktná osoba, ak iná ako zodpovedný riešiteľ, poverená štatutárnym zástupcom žiadateľa vykonávať administratívne vedenie projektu.)
		Project Manager / Project Leader (Contact person, other than the principal investigator, authorized by the statutory representative to conduct the administrative management of the project on behalf of the applicant.)
01	Meno a priezvisko, Xxxxxx / Name and Surname, Titles
	Telefón / Phone
	Email

VV-2018-P2.7	Existujúca infraštruktúra (Opíšte existujúcu infraštruktúru, v členení podľa jednotlivých zapojených organizácií, ktorá sa bude využívať pre prácu na projekte.)
	Please, describe the existing infrastructure, in details, by listing all the organizations involved in the project work.)
Slovenská verzia / Slovak version: Naše laboratóriá sú súčasťou BioMed-u Martin (Martinské centrum pre biomedicínu), Jesseniovej lekárskej fakulty v Martine (JLF) Univerzity Komenského, Bratislava. BioMed Martin je súčasťou troch centier financovaných EÚ: Biomedicínske Centrum, Centrum Excelentnosti pre výskum v personalizovanej terapii (CEVYPET) a Centrum Excelentnosti pre experimentálnu a klinickú pneumológiu (CEKR). Navyše, zodpovedný riešiteľ je členkou špičkového vedeckému tímu „Kardiorespiračný systém a viscerálna bolesť (CAREVIP)” Všetky potrebné prístroje a „state-of-the-art“ vybavenie nevyhnutné pre projekt je k dispozícii (investície v posledných 5 rokov), vrátane Multifotónového konfokálneho zobrazovacieho systému založenom na Zeiss LSM 880 NLO mikroskope so spektrálnymi 32 GaAsP detektormi, 3 NDD GaAsP detektormi a multifotonového lasera Coherent Chameleon ULTRA II (680-1080 nm, 3,5 W) v kombinácii s Chameleon Compact OPO (1000 až 1600 nm) a FLIM detektorom, pripojenom na Zeiss Axio Examiner electrofyziologický mikroskop samozrejme doplnené príslušnými alytickými softvérmi. Ďalej, BioMed Xxxxxx disponuje základným aj špeciálnym vybavením pre bunkovú a molekulárnu biológiu a mikrobiológiu (laminárne boxy, trepačky, inkubačné termostaty s CO2, hypoxické boxy, elektroforézy, PCR, RT- PCR, centrifúgy, ultracentrifuga), biochémiu (elektroforézy, ultracentrifúgy, UV-VIS spektrofotometer, fluorescenčný / luminiscenčný spektrometer) ako aj na histologickú analýzu tkanív. Samozrejme, že celý inštitút je akreditovaný pre prácu s bunkovými kultúrami a geneticky modifikovanými organizmami v rozsahu potrebnom na dosiahnutie všetky stanovené ciele projektu. Zodpovedný riešiteľ, v úzkej spolupráci so zástupcom zodpovedného riešiteľa (MP) a ďaľším vedeckým pracovníkom (RH), bude koordinovať celú výskumnú skupinu. Všetci seniorskí výskumníci pracovníci absolvovali dlhodobé stáže na medzinárodne uznávaných vedeckých inštitúciách a majú dlhodobé (kombinovane > 15 rokov medzinárodných skúseností) skúsenosti v spoluprácach na viacerých projektoch (VEGA, APVV, medzinárodné projekty - MJFF, Parkinson`s disease foundation (AKT), projekty privátneho sektora - Merck Serono GmbH (AKT)). Preto nepochybujeme o produktívnej spolupráci medzi členmi nášho výskumného tímu. Hlavné oblasti expertíz jednotlivých členov výskumného tímu, sa navzájom dopĺňajú a pokrývajú všetky hlavné oblasti potrebné pre úspešné splnenie cieľov predkladaného projektu. Mladí vedeckí pracovníci budú vyškolení pod dohľadom skúsenejších kolegov, naučia sa nové metódy v zmysle, že jednotliví členovia nášho výskumného tímu sa nielen vzájomne dopĺňajú, ale v prípade potreby, môže aj nahradiť iného výskumníka. Okrem toho plánujeme neformálne stretnutia / semináre zamerané na otázky a problémy súvisiace s projektom. Tieto sa budú konať v dvojtýždňových intervaloch a pod dohľadom „starších“ skúsených výskumných pracovníkov (AKT, MP). Zodpovedný riešiteľ bude tiež koordinovať špeciálne semináre, ktorý sa budú konať raz za tri

mesiace s formálnymi prezentáciami všetkých vedeckých pracovnékov. Okrem diskusií o dosiahnutých výsledkoch, zodpovedný riešiteľ bude plánovať výskumné aktivy na ďalšie obdobie.

Anglická verzia / English version:

Our laboratories belong to BioMed Martin (Biomedical center Martin), Xxxxxxxxx school of medicine Martin (JLF), Comenius University, Bratislava is a part of three EU funded centers: Biomedical Center, Center of Excellence for research in personalized therapy (CEVYPET) and Center of Excellence for experimental and clinical respirology (CEKR). In addition, the PI is a member of the leading scientific team "Cardiorespiratory System and Visceral Pain (CAREVIP)".

All necessary cutting edge and state-of-the-art equipments are available for the project (investment in the last 5 years) including Multiphoton/confocal imaging system based on Zeiss LSM 880 NLO microscope (Aims 1, 2 and 3) with spectral GaAsP 32 detectors, 3 NDD GaAsP detectors and multiphoton laser Coherent Chameleon ULTRA II (680 - 1080 nm, 3.5W) combined with Chameleon Compact OPO (1000 to 1600 nm) and FLIM detector mounted on fixed stage upright Zeiss Axio Examiner electrophysiology microscope of course, accompanied by relevant allied software. Furhermore, BioMed Xxxxxx is equipped with basic as well as special instrumentation for cell culture and microbiology (flowboxes, culture shakers, incubation thermostats with CO2, hypoxic box), molecular and cellular biology (electrophoreses, PCR, RT-PCR, centrifuges, ultracentrifuge), biochemistry (electrophoreses, ultracentrifuges, UV-VIS spectrophotometer, fluorescence/ luminescence plater reader) as well as histological tissue analysis. Of course, the whole institute is accredited to work with cell culture and genetically modified organisms to the extent necessary to accomplish all individual project tasks.

The PI, in close collaboration with deputy XX (MP) and senior researcher (RH), will coordinate the whole research group. All senior researchers have accomplished long-term fellowships at the established international scientific institutions and have a long (combined > 15 years of international experience) record of collaborative studies (documented by co- authorship of impact publications) on a number of projects (VEGA, APVV, international projects - MJFF, Parkinson`s disease foundation (AKT), private sector projects - Merck Serono GmbH (AKT)). Therefore, productive collaboration between the members of our research team is a well-established. The areas of expertise of research team members are complementary and cover all major areas necessary for successful fulfillment of the project objectives. Young scientists will be supervised by the senior researches and will learn new methods in a way, that the individual members of our research team complement each other (compounding of the expertise) and, if needed, can substitute should a particular researcher become unavailable. Furthermore, informal meetings focused on the project related issues will be carried out regularly on the two-week base and will be overseen by the experienced researchers (AKT, MP). The PI will also supervise workshops, held in every three months with formal presentations of all scientific members of the team. In

addition to discussions of the obtained results the detailed plans for the next period will be updated at the meetings.

OPISNÝ FORMULÁR PROJEKTU Príloha č. 3. 1. B.

DESCRIPTIVE PROJECT FORM Annex Nr. 3. 1. B.

VV-2018-X	Xxxxx zámer projektu
	The project charter
Identifikačné číslo projektu / Project ID	2018/10-UKMT-6
Názov projektu	Detekcia skorých štádií Parkinsonovej choroby pomocou fluorescenčnej multifotónovej mikroskopie a FLIM analýzy.
Project Title	Detection of early stages of Parkinson's disease by fluorescence multiphoton microscopy and FLIM analysis.
Akronym projektu	PADIFLIM
Acronym of the Project	PADIFLIM

VV-2018-R		Vecný zámer projektu
		The project Charter
A	Východisková situácia	Parkinsonova choroba (PCH) je progresívne neurodegeneratívne ochorenie, charakterizované postupnou stratou dopaminergických neurónov v oblasti substantia nigra v mozgu. Po symptomatologickej stránke sa PCH najčastejšie spája s motorickými príznakmi ako sú: bradykinéza, svalová tuhosť, posturálna nestabilita, či tremor (1). Oveľa skôr však možno badať nemotorické prejavy ochorenia súvisiace hlavne s funkciou enterického nervového systému (2). Pomalá progresia PCH bola charakterizovaná už Xxxxxxx, ktorý si všimol, že neurodegeneratívne zmeny na nižších úrovniach nervového systému boli prítomné už dávno pred terminálnymi štádiami ochorenia (3). Podobná situácia je popísaná aj v animálnych modeloch, kde je podla dostupných prác patogenéza PCH zahájená v periférnom nervovom systéme tráviaceho traktu (GIT) oveľa skôr (1-3 týždne) ako zasiahne mozog (6 a viac týždňov) (4,5). Typickým znakom ochorenia je vnútrobunková akumulácia proteínových inklúzií, ktoré sa nazývajú Lewyho telieska (LB). Hlavnou zložkou LB je agregovaný proteín α-synukleín (αS) (6), no ďalšími zložkami sú aj proteíny ubiquitín, synfilín-1 a cytoskeletálne proteíny (7). α-synukleín je malý, neuronálny proteín (140 aminokyselín), kódovaný SNCA génom. Zvýšená expresia génu pre αS a jeho následná agregácia je dôležitou súčasťou progresie ochorenia a je tak jednou z mála diagnostických kritérií prítomnosti PCH (8). Fyziologická úloha αS je doposiaľ neobjasnená, no viaceré štúdie sa svojimi výsledkami zhodujú, že sa jedná o proteín regulujúci fúziu resp. delenie transportných vezikúl v rámci bunky, transport neurotransmiterov do synaptických spojení (9) a rovnako sa zdá byť dôležitý pre proces synaptickej plasticity (10). Agregácia αS je ďalej spojená aj s poruchami mitochondriálnej funkcie (11,12).

Vo všeobecnosti sú poruchy energetického metabolizmu súvisiace s dysreguláciou metabolizmom NADH, hladiny oxidačného stresu, či poruchy mitofagických procesov popísané ako kauzálne príčiny vzniku väčšiny neurodegeneratívnych ochorení, PCH nevynímajúc (13,14,12). Práve preto sa navodenie porúch mitochondriálnych funkcií, inými slovami mitopatií, stalo najčastejším nástrojom pre modelovanie patogenézy PCH v experimentálnych podmienkach. Pesticídny prípravok, akým je napr. rotenón (inhibítor komplexu I mitochondriálneho dýchacieho reťazca) je jednou z najpoužívanejších látok schopných navodiť príznaky parkinsonizmu v bunkových líniách ako aj v animálnych modeloch (15). Podávanie rotenónu má za následok akumuláciu αS naprieč PNS a CNS, no navodzuje aj motorické poruchy v experimentálnych myšacích modeloch (4,5).

Z literatúry však nie je jasné, kde a kedy v rámci bunkovej patogenézy dôjde ku iniciácii tvorby proteínových agregátov a v akom poradí postihujú funkcie subcelulárnych štruktúr. Daný fakt môže byť spôsobený jednak rôznorodosťou metabolizmu odlišných typov bunkových línií, ktoré sú pre jednotlivé experimenty používané, no ďalšou prekážkou presnej detekcie v čase je problematická procedúra, resp. nedostatočná senzitivta imunohistochemického či western blotového dôkazu prítomnosti agregovaného αS proteínu.

K riešeniu tohto problému ako aj k objasneniu postupnosti vnútrobunkovej patogenézy PCH by mohlo napomôcť využitie moderných zobrazovacích metód založených na „životnosti“ fluorescenčného žiarenia (FLIM mikroskopia) emitovaného sledovaným fluóroforom vo vzorke. Je totiž známe, že v dôsledku mitochondriáneho poškodenia súvisiaceho s neurodegeneratívnymi procesmi alebo počas inhibície komplexu I mitochondriálneho dýchacieho reťazca v experimentálnych podmienkach dochádza ku akumulácii NADH (15, 5. Tento účinok je evidentný už niekoľko minút po expozícii rotenónu v bunkových modeloch (16). NADH molekula je okrem iného práve považovaná za jeden z endogénnych fluorofórov a popri jeho koncetračných zmenách charakterizovaných intenzitou fluorescencie je spomenutá FLIM mikroskopia schopná detegovať zmeny v rýchlosti vyhasínania NADH fluorescencie po jeho excitácii počas mikroskopickej analýzy (17). V literatúre je už dávnejšie popísané, že životnosť fluorescenčnej emisie NADH je významne ovplyvnená molekulami obklopujúcimi tento fluorofor. Vo všeobecnosti je pre voľný (rozpustný) NADH charakteristický veľmi rýchly rozklad fluorescencie (0,3 ns), zatiaľ čo jeho forma viazaná na bielkoviny sa naopak prejavuje dlhšou životnosťou fluorescencie (až niekoľko nanosekúnd). Na základe tohto javu je možné odlíšiť metabolický posun získavania energie od glykolýzy, kedy je vačšina NADH voľne rozpustná v cytoplazme (0.3ns), v prospech oxidačnej fosforylácie (2.5ns), kedy je dĺžka fluorescencie NADH predĺžená po väzbe na mitochondriálny komplex I (18). Naproti tomu inhibícia terminálneho respiračného reťazca vedie naopak k stimulácii glykolýzy a tvorbe rozpustnej cytoplazmatickej forme NADH, ktorá je sprevádzaná rýchlym poklesom životnosti fluorescencie (19). Inhibícia terminálneho dýchania v mitochondriách pri experimentálnom použití rotenónu je sprevádzaná „prepnutím“ energetického metabolizmu do anaeróbnej glykolýzy. Proces je tak možné pripodobniť ku Warburgovmu efekt a zvyčajne vedie k skráteniu celkovej životnosti fluorescencie NADH.

Podľa nedávnej štúdie od Plotegher (20) by diskriminácia medzi dlhou a krátkou emisiou fluorescencie NADH mohla slúžiť aj na monitorovanie procesu agregácie proteínov v bunkách. V in vitro

štúdiách autori pozorovali predĺženie emisie fluorescencie NADH ako

		reakciu na nadexpresiu αS, či prítomnosť oligomérnych fibríl αS (20). Táto štúdia ukázala, že fluorescenčné zobrazovanie životnosti (FLIM) je možné použiť ako jednoduchý a rýchly nástroj vhodný na monitorovanie procesov agregácie αS prezatiaľ v experimentálnych modeloch PCH. Metodika zobrazovania životnosti fluorescencie NADH tak poskytuje vhodný potenciál pre jej možné využitie v monitorovaní a lokalizácii vnútrobunkových procesoch prebiehajúcich v súvislosti so vznikom cytoplazmatických inklúzii počas progresie PCH. 1) XXXXXX XX, XXX VM, XXXXXXXXXXX JQ (2001) Synucleinopathies: clinical and pathological implications. Arch Neurol 58:186-90. 2) XXXXXX X, XXXXX X (2008): Nonmotor manifestations of Parkinson's disease. Xxx Neurol 64 Suppl 2: S65-80. 3) BRAAK H, DEL TREDICI K, XXX U, DE VOS RA, XXXXXX STEUR EN, XXXXX E (2003) Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease. Neurobiol Aging 24: 197-211. 4) TIEU K (2011). A guide to neurotoxic animal models of Parkinson's disease. Cold Spring Harb Perspect Med. 2011 Sep;1(1):a 5) PAN-MONTOJO F, ANICHTCHIK O, XXXXXX Y, XXXXX L, XXXXXXX S, XXXX R, XXXXXXX S, XXXXX G, XXXXXXXXXXX MG, XXXXXXXXX H, XXXX RH (2010) Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One 5: e8762. 6) XXXXXXXXXXX MG, XXXXXXX ML, XXX VM, XXXXXXXXXXX JQ, XXXXX R, XXXXXXX X (1997) Alpha- synuclein in Lewy bodies. Nature 388: 839-840. 7) FORNO LS, XXXXXXXX LE, XXXXX I, XXXXXXXX JW (1996) Electron microscopy of Lewy bodies in the amygdala-parahippocampal region. Comparison with inclusion bodies in the MPTP-treated squirrel monkey. Adv Neurol 69: 217-228. 8) XXXXX J, XXX X, XXXXXXX MR, XXXXX-XXXXX X, XXXXXXXXX X (2006): Genetics of Parkinson's disease and parkinsonism. Xxx Xxxxxx 60: 389-398. 9) NEMANI VM, XX W, XXXXX V, XXXXXXXX K, XXXX B, XXX MK, XXXXXXXX FA, XXXXXX RA, XXXXXXX RH (2010) Increased expression of alpha-synuclein reduces neurotransmitter release by inhibiting synaptic vesicle reclustering after endocytosis. Neuron 65: 66-79. 10) XXXXXXX DF, XXXXXX XX (1998) The synucleins: a family of proteins involved in synaptic function, plasticity, neurodegeneration and disease. Trends Neurosci 21:249-54. 11) CHINTA SJ, MALLAJOSYULA XX, XXXX A, XXXXXXXX XX (2010) Mitochondrial α-synuclein accumulation impairs complex I function in dopaminergic neurons and results in increased mitophagy in vivo. Neurosci Lett 486:235-9. 12) DEVI L, XXXXXXXXXXXX V, PRABHU BM, XXXXXXXX NG, ANANDATHEERTHAVARADA HK (2008) Mitochondrial import and accumulation of alpha-synuclein impair complex I in human dopaminergic neuronal cultures and Parkinson disease brain. J Biol Chem 283:9089-100. 13) XXXXXXXXX ET, XXXX VR, XXXXX E, XXXXXXXXXXXX D, XXXXXXX SY, XXXX EL, XXXXX A, XXXXXXXXX SM, XXX ENJ, XXXXX AC, XXXXXX F, XXXXXXX X, XX CH, XXXX AJ, XXXXX AM, XXXXXXX S, XXXXXXX XX, EATON S, COSTA XXX, XXXXXXX PS, XXXXXXXX SM, XXXXXX MR, XXXX-XXXXX K, XXXXXXXX MJ, XXXXXXXX XX, WORK LM, XXXXXX C, XXXXX T, XXXXXX MP (2014) Ischaemic accumulation of succinate controls reperfusion injury through mitochondrial ROS. Nature 515: 431-435. 14) BLACKER TS, DUCHEN MR (2016) Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence. Free Radic Biol Med 100: 53-65. 15) XXXXX X, XXXXX S, XXXXXXX-XXXXX X, XXXXXXXXXXX S (2012) Classic and new animal models of Parkinson's disease. J Biomed Biotechnol 2012: 845618. 16) BLACKER TS, DUCHEN MR (2016) Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence. Free Radic Biol Med 100: 53-65. 17) XXXXXXXXXX-TOMSIA K, XXXXX AG, XXXXXX MA, MADLUM KN, XXXX AM, XXXXX MS, XXXXXX EM (2014) Multiphoton fluorescence lifetime imaging microscopy reveals free-to-bound NADH ratio changes associated with metabolic inhibition. J Biomed Opt 19: 086016. 18) SKALA MC, RICHING KM, XXXXXXX-XXXXXXXXXXX X, XXXXXXXX J, XXXXXXXX KW, XXXXX JG, XXXXXXXXX N (2007) In vivo multiphoton microscopy of NADH and FAD redox states, fluorescence lifetimes, and cellular morphology in precancerous epithelia. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 19494-19499. 19) XXXXXXXXX C, XXXXXX JL, XXXXXXXX LA, XXXXXXX E: Phasor fluorescence lifetime microscopy of free and protein-bound NADH reveals neural stem cell differentiation potential. PLoS One 7: e48014, 2012. 20) PLOTEGHER N, XXXXXXXXX C, XXXXX S, XXXXXXXX M, XXXXXXX S, XXXXXXX E, XXXXXXX L (2015) NADH fluorescence lifetime is an endogenous reporter of alpha-synuclein aggregation in live cells. FASEB J 29: 2484-2494.
	Background Situation	Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by the progressive loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra in brain. Symptomatically, PD is most often associated with motor symptoms such as bradykinesia, muscle stiffness, postural instability, or tremor (1). Much earlier, however, non-motoric manifestations of the disease mainly related to the function of the enteric nervous system (2) may occur. Slow progression of PD was already characterized by Xxxxx, who noted that neurodegenerative changes at lower levels of the nervous system were present long before the terminal stages of the disease (3). A similar situation is also noted in animal models where PD pathogenesis is initiated in the peripheral nervous system of the digestive tract (GIT) much earlier (1-3 weeks) than the brain (6 weeks and more) (4,5). A typical feature of the disease is the accumulation of protein inclusions called Lewy body (LB). The main component of LB is the aggregated α-synuclein (αS) protein (6); the other components are ubiquitin proteins, synpholin-1 and cytoskeletal proteins (7). α- synuclein is a small, neuronal protein (140 amino acids) encoded by

the SNCA gene. An increased expression of αS and its subsequent aggregation is an important part of disease progression and present one of the few diagnostic criteria for the presence of PD (8). The physiological role of αS has so far not been elucidated, but several studies conclude that it plays role in regulation of fusion, respectively dividing transport vesicles within the cell, neurotransmitters transport to synaptic connections (9) and also seems to be important for the process of synaptic plasticity (10). Aggregation of αS is further associated with disorders of mitochondrial function (11,12). Subsequent dysregulation of NADH metabolism along with increased oxidative stress was recognized as another characteristic of neurodegenerative diseases (13,14). Just the onset of mitochondrial impairment has become the most common tool for modeling PD pathogenesis under experimental conditions. A pesticide such as, rotenone (a mitochondrial respiratory chain I inhibitor) is one of the most commonly used agent capable of inducing parkinsonism-like phenotype in cellular as well as in animal models (15). Xxxxxxxx administration results in the accumulation of αS across the PNS and CNS, but also induces motor disorders in experimental mouse models (4,5).

However, it is not entirely clear from the literature where and when during the pathogenesis progression, the initiation of protein aggregation occurs and in what order the affected subcellular structures are impaired. This fact can be caused by the variety of metabolism of different types of cell lines that are used for individual experiments but another obstacle to precise detection over time is the problem of immunohistochemical or Western blotting evidence of the presence of aggregated αS protein.

To resolve this problem as well as to elucidate the progression of intracellular pathogenesis of PD, it could be helpful the use of modern imaging methods based on the fluorescence lifetime (FLIM microscopy) of emitted by the monitored fluorophore in the sample. It has been already documented, that due to mitochondrial damage associated with neurodegenerative processes or during inhibition of the mitochondrial respiratory chain I complex under experimental conditions, accumulation of NADH accurs (15,5). This effect is evident in few minutes after rotenone exposure in cellular models (16). NADH has been recognized as a type of endogenous fluorophore and beside the changes in fluorescence intensity of detected signal, advanced time resolved microscopy is able to sensitize increase/decrease of fluorecence signal decay in time after excitation (17). It is well known, that the lifetime of fluorescence emission is significantly affected by molecules surrounding the fluorophore. In general, very quick fluorescence decay (0,3 ns) is characteristic for free (soluble) NADH, while its protein bound species are reversely manifested by longer fluorescence lifetime (up to few nanoseconds). Based on this phenomenon, metabolic shift from glycolysis (0.3ns) to oxidative phosphorylation (2.5ns) after binding to mitochondrial complex I could be distinguished 18). In contrast, inhibition of terminal respiratory chain results in glycolysis stimulation and generation of soluble cytoplasmic NADH, which is accompanied by rapid decrease of fluorescence lifetime 19). According to this, inhibition of terminal respiration in mitochondria by xxxxxxxx is accompanied with switching of energy metabolism to favor anaerobic glycolysis. Such process then mimics Warburg´s effect and usually results in shortening of NADH fluorescence lifetime in common.

According to a recent study by Xxxxxxxxx (20), discrimination between the long and short NADH lifetime fluorescence emission

		could also serve for monitoring the process of protein aggregation in cells. In in vitro studies, authors observed prolonged emission of NADH fluorescence in response to αS overexpression or treatment with αS protofibril seeds (20). By this study, fluorescence lifetime imaging (FLIM) demonstrated the potential to be used as simple and rapid monitoring tool of the processes occurring at least in experimental models of PD. Thus, the NADH fluorescence lifetime imaging methodology provides an appropriate potential for its possible use in monitoring and localization of intracellular processes occurring in line with the cytoplasmic inclusion formation during progression of PD. XXXXXX X, XXXXX X (2008): Nonmotor manifestations of Parkinson's disease. Xxx Neurol 64 Suppl 2: S65-80. XXXXXX XX, XXX VM, XXXXXXXXXXX JQ (2001) Synucleinopathies: clinical and pathological implications. Arch Neurol 58:186-90. BRAAK H, DEL TREDICI K, XXX U, DE VOS RA, XXXXXX XXXXX EN, XXXXX E (2003) Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease. Neurobiol Aging 24: 197-211. XXXXXXXXXXX MG, XXXXXXX ML, XXX VM, XXXXXXXXXXX JQ, XXXXX R, XXXXXXX X (1997) Alpha-synuclein in Lewy bodies. Nature 388: 839-840. FORNO LS, DELANNEY LE, XXXXX I, XXXXXXXX JW (1996) Electron microscopy of Lewy bodies in the amygdala-parahippocampal region. Comparison with inclusion bodies in the MPTP-treated squirrel monkey. Adv Neurol 69: 217-228. XXXXX J, XXX X, XXXXXXX MR, XXXXX-XXXXX K, XXXXXXXXX X (2006): Genetics of Parkinson's disease and parkinsonism. Xxx Xxxxxx 60: 389-398. XXXXXX VM, XX W, XXXXX V, XXXXXXXX K, XXXX B, XXX MK, XXXXXXXX FA, XXXXXX RA, XXXXXXX RH (2010) Increased expression of alpha-synuclein reduces neurotransmitter release by inhibiting synaptic vesicle reclustering after endocytosis. Neuron 65: 66-79. XXXXXXX DF, XXXXXX XX (1998) The synucleins: a family of proteins involved in synaptic function, plasticity, neurodegeneration and disease. Trends Neurosci 21:249-54. CHINTA SJ, MALLAJOSYULA XX, XXXX A, XXXXXXXX XX (2010) Mitochondrial α-synuclein accumulation impairs complex I function in dopaminergic neurons and results in increased mitophagy in vivo. Neurosci Lett 486:235-9. XXXX L, XXXXXXXXXXXX V, XXXXXX BM, AVADHANI NG, ANANDATHEERTHAVARADA HK (2008) Mitochondrial import and accumulation of alpha-synuclein impair complex I in human dopaminergic neuronal cultures and Parkinson disease brain. J Biol Chem 283:9089-100. XXXXXXXXX ET, XXXX VR, XXXXX E, XXXXXXXXXXXX D, XXXXXXX SY, XXXX EL, XXXXX A, XXXXXXXXX SM, XXX ENJ, XXXXX AC, XXXXXX F, XXXXXXX X, XX CH, XXXX AJ, XXXXX AM, XXXXXXX S, XXXXXXX RC, EATON S, COSTA ASH, XXXXXXX PS, XXXXXXXX SM, XXXXXX MR, XXXX-XXXXX K, XXXXXXXX MJ, XXXXXXXX XX, WORK LM, XXXXXX C, XXXXX T, XXXXXX MP (2014) Ischaemic accumulation of succinate controls reperfusion injury through mitochondrial ROS. Nature 515: 431-435. BLACKER TS, DUCHEN MR (2016) Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence. Free Radic Biol Med 100: 53-65. XXXXX X, XXXXX X, XXXXXXX-XXXXX X, XXXXXXXXXXX S (2012) Classic and new animal models of Parkinson's disease. J Biomed Biotechnol 2012: 845618. TIEU K (2011). A guide to neurotoxic animal models of Parkinson's disease. Cold Spring Harb Perspect Med. 2011 Sep;1(1):a PAN-MONTOJO F, ANICHTCHIK O, XXXXXX Y, XXXXX L, XXXXXXX S, XXXX R, XXXXXXX S, XXXXX G, XXXXXXXXXXX MG, XXXXXXXXX H, XXXX RH (2010) Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One 5: e8762. BLACKER TS, DUCHEN MR (2016) Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence. Free Radic Biol Med 100: 53-65. XXXXXXXXXX-TOMSIA K, XXXXX AG, XXXXXX MA, MADLUM KN, XXXX AM, XXXXX MS, XXXXXX EM (2014) Multiphoton fluorescence lifetime imaging microscopy reveals free-to-bound NADH ratio changes associated with metabolic inhibition. J Biomed Opt 19: 086016. SKALA MC, RICHING KM, XXXXXXX-XXXXXXXXXXX X, XXXXXXXX J, XXXXXXXX KW, XXXXX JG, XXXXXXXXX N (2007) In vivo multiphoton microscopy of NADH and FAD redox states, fluorescence lifetimes, and cellular morphology in precancerous epithelia. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 19494-19499. XXXXXXXXX C, XXXXXX JL, XXXXXXXX LA, XXXXXXX E: Phasor fluorescence lifetime microscopy of free and protein-bound NADH reveals neural stem cell differentiation potential. PLoS One 7: e48014, 2012. PLOTEGHER N, XXXXXXXXX C, XXXXX S, XXXXXXXX M, XXXXXXX S, XXXXXXX E, XXXXXXX L (2015) NADH fluorescence lifetime is an endogenous reporter of alpha-synuclein aggregation in live cells. FASEB J 29: 2484-2494.
B	Ciele projektu	Cieľom predkladaného projektu je zavedenie novej metódy detekcie agregátov αS vo vitálnych tkanivách/biopsiách v periférnych tkanivách v myšacom modeli patogenézy PCH pomocou FLIM analýzy. Agregácia αS je jedným zo znakov PCH, pričom αS je klinicky detekovateľný v rôznych štádiách ochorenia v CNS, ako aj v určitých oblastiach GIT. Prítomnosť agregovaného αS v periférnych tkanivách sa môže vyskytnúť už 10 rokov pred motorickými príznakmi. Keďže súčasné diagnostické postupy sú založené na post mortem histologickej analýze tkanív CNS, je nevyhnutné hľadať nové, rýchle a neinvazívne postupy zamerané hlavne na skorú diagnostiku ochorenia. Jednou z možností detekcie agregátov αS je použitie TioflavínuS (ThS), fluorescenčnej permeabilnej próby, široko používanej vo výskume neurodegeneratívnych ochorení. Druhá možnosť predstavuje použitie FLIM analýzy, zmeny životnosti fluorescencie, endogénneho NADH. Životnosť fluorescenčného žiarenia NADH sa mení v súvislosti s jeho naviazaním sa na ďalšie molekuly resp. jeho

			voľnou prítomnosťou v cytosole. V in vitro modeloch, sa životnosť fluorescencie NADH predlžuje v prítomnosti nad-exprimovaného αS alebo proto-fibríl αS, čo naznačuje potenciál FLIM analýzy pri hľadaní jednoduchého a rýchleho nástroja na monitorovanie procesov vyskytujúcich sa v procese rozvoja patológie PCH. V našom laboratóriu sme však zistili, že podobne ako NADH, aj v prípade farbenia ThS dochádza k zmene životnosti fluorescencie po jeho naviazaní na agregované proteíny. FLIM analýza predstavuje citlivejšiu metódu a dokáže odhaliť aj zmeny, ktoré ešte nie sú viditeľné pomocou klasickej fluorescenčnej mikroskopie. V projekte budeme indukovať patologické zmeny pripomínajúce PCH v myšacom modeli pomocou orálnej aplikácie rotenónu, čo najskôr vedie k tvorbe agregátov αS v orgánoch tráviaceho traktu a neskôr aj na úrovni CNS. Pomocou klasických metód (biochemická a histologická analýza) a inovatívnej FLIM analýzy endogénneho NADH a/alebo exogénneho ThS budeme detekovať samotné agregáty αS v rôznych periférnych tkanivách a stanovíme časový priebeh ich tvorby čím určíme prvotné miesto ich tvorby a postupné šírenie naprieč bunkou.
	Objectives of the Project			The aim of the present study is to introduce a new method for αS aggregates detection in vital tissues/biopsies in peripheral tissues in a mouse model of PD by FLIM analysis. Aggregation of αS is one of the hallmark of PD clinically detectable at various stages of CNS and certain regions of GIT. Aggregated αS in peripheral tissues may appear for 10 years before the central pathology. Since current diagnostic procedures are based on post-mortem histological analysis of CNS tissues, it is necessary to develop new, rapid and non-invasive procedures focused primarily at early diagnosis of the disease. One possibility for αS aggregates detection is ThioflavinS (ThS), a fluorescence permeable probe, widely used in neurodegenerative diseases research. The second option analysis of changes in fluorescence lifetime of endogenous NADH. The lifetime of NADH fluorescence varies with its binding to other molecules. In in vitro models, the lifetime of NADH fluorescence is prolonged in the presence of an overexpressed αS or αS proto-fibrils indicating the potential of FLIM analysis in finding a simple and fast tool for monitoring processes involved in the development of PD pathology. In our laboratory, however, we found that similar to NADH, even the ThS‘s fluorescence lifetime changes after binding to aggregated proteins, while FLIM analysis is a more sensitive method and can also detect changes that are not detectable with classical fluorescence microscopy. In the project, we will mimic the PD pathological in mouse model by the oral administration of rotenone, leading to αS aggregates formation in GIT and later also at CNS. Using classical methods (biochemical and histological) and innovative FLIM of endogenous NADH and/or exogenous ThS, we will detect the αS aggregates in various peripheral tissues and determine the time course of their appearance to identify the primary site of their appearance and their propagation.
	C	Relevantnosť k oblastiam podporovaným v danom roku		Predkladaný projekt je v plnom súlade s podporovanou oblasťou stanovenou vo schválenom zozname podporovaných oblastí na daný rok - Inovatívne diagnostické a terapeutické postupy a produkty personalizovanej / precíznej medicíny a produktovej línii Včasná, rýchla a validná diagnostika (1). V projekte budú využívané najnovšie poznatky a metodické postupy v oblasti výskumu PCH, fluorescenčnej konfokálnej mikroskopie a FLIM analýzy.

	Relevance to the supported priority area(s) for the current year	The submitted project is in full compliance with the supported area specified in the approved list of supported areas for this year - Innovative diagnostic and therapeutic procedures and personalized / precision medicine products and product line Early, rapid and valid diagnostics (1). The project will use the latest knowledge and methodologies in the field of PD research, fluorescence confocal microscopy and FLIM analysis.
D	Potenciálny dopad Vami dosiahnutých výsledkov na medicínsku prax	Keďže súčasné diagnostické postupy sú založené na post mortem histologickej analýze tkanív CNS, je nevyhnutné hľadať alternatívne postupy zamerané hlavne na skorú diagnostiku ochorenia. Nové, rýchle a neinvazívne postupy zamerané hlavne na skorú diagnostiku ochorenia, by mohli mať pozitívny dopad na spomalenie progresie ochorenia a tým zlepšenie celkového života pacientov. Rovnako tieto nové postupy, by mohli pomôcť aj pri hľadaní nových možností liečby, prípadne úplného zastavenia progresie ochorenia.
	Potential impact of your results for the clinical practice	Since current diagnostic procedures are based on post-mortem histological analysis of CNS tissues, it is necessary to develop alternative procedures focused primarily at early diagnosis of the disease. New, fast and non-invasive procedures, mainly focused on the early diagnosis of the disease, could have a positive impact on slowing down the disease pregression and thus improving the overall life of patients. In addition, these new techniques could also provide new information that would lead to new, better and more effective treatments for PD or potentially improve disease progression.
E	Vedecko-technologická excelentnosť	Naším cieľom je prvýkrát aplikovať FLIM analýzu endogénnych alebo exogénnych fluorofórov na detekciu agregátov αS vo vitálnych tkanivách traviaceho traktu v myšom modeli PCH. V predbežných výsledkoch nášho laboratória získaných na bunkových líniách pomocou sme FLIM analýzy NADH (endogénny fluorofór) a ThS (exogénny fluorofór) odhalili, že v obidvoch prípadoch dochádza k zmenám životnosti ich fluorescencie v dôsledku prítomnosti agregovaných proteínov (αS). Navyše, analýza zmien životnosti fluorescencie, poskytuje komplementárne informácie ku klasickej konfokálnej mikroskopii, je citlivejšia a teda je schopná odhaliť aj drobné zmeny, ktoré nie sú viditeľné klasickou mikroskopiou. Doposiaľ však boli tieto analýzy apikované len na rekombinantné systémy, prípadne bunkové línie. Preto predpokladáme, že podobne ako v bunkových líniách, budeme pomocou FLIM analýzy schopný detekovať prítomnosť agregovaného α-synukleín aj v prípade tkanív tráviaceho traktu. Predpokladáme, že použitím myšacieho modelu, budeme schopní lepšie definovať výskyt a časový priebeh tvorby agregátov αS v rozličných typoch buniek naprieč tkanivami tráviaceho traktu. Náš všeobecný zámer ma trojaký charakter. 1) detekcia αS agregátov pomocou FLIM analýzy 2) identifikácia miesta/tkanív tráviaceho traktu, kde primárne dochádza k tvorbe αS agregátov 3) analýza šírenia týchto agregátov v tkanivách tráviaceho traktu Vedecká úroveň projektu. Predkladaný projekt spĺňa najvyššie vedecké štandardy a využíva výhradne vedecké metódy. Toto tvrdenie je podporené používaním „start-of-the-art“ inovatívnej technológie vrátane Multifotónového konfokálneho zobrazovacieho systému založenom na Zeiss LSM 880 NLO mikroskope so spektrálnymi 32 GaAsP detektormi, 3 NDD GaAsP detektormi a multifotonového lasera Coherent Chameleon ULTRA II (680-1080 nm, 3,5 W) v kombinácii s Chameleon Compact OPO (1000 až 1600 nm) a FLIM detektorom, pripojenom na Zeiss Axio Examiner electrofyziologický mikroskop samozrejme doplnené

		príslušnými alytickými softvérmi. Naše laboratóriá sú súčasťou BioMed-u Martin (Martinské centrum pre biomedicínu), Jesseniovej lekárskej fakulty v Martine (JLF) Univerzity Komenského, Bratislava. BioMed Martin je súčasťou troch centier financovaných EÚ: Biomedicínske Centrum, Centrum Excelentnosti pre výskum v personalizovanej terapii (CEVYPET) a Centrum Excelentnosti pre experimentálnu a klinickú pneumológiu (CEKR). Navyše, zodpovedný riešiteľ je členkou špičkového vedeckému tímu „Kardiorespiračný systém a viscerálna bolesť (CAREVIP)”.
	Scientific and Technological Excellence	We aim to provide, for the first time the FLIM analysis of endogenous or exogenous fluorophores for the detection of αS aggregates in the vital tissues of the tract in the mouse model of PD. In preliminary results of our laboratory obtained on cell lines using the FLIM analysis of NADH (endogenous fluorophore) and ThS (exogenous fluorophore), we have revealed that both fluorescence lives change due to to the presence of aggregated proteins (αS). In addition, fluorescence life changes analysis provides complementary information to conventional confocal microscopy, is more sensitive, and is therefore able to detect minor changes that are not visible by classical microscopy. So far, however, these analyzes have only been applied to recombinant systems or cell lines. Therefore, we assume that, similarly to cell lines, we will be able to detect the presence of aggregated αS in the tissues of the digestive tract by using FLIM method. Furthermore, we also assume that by using a mouse model, we will better define the occurrence and time course of α-synuclein aggregate formation in other tissues of digestive tract. Our overall objective has a threefold character 1) detection of αS aggregates by FLIM analysis 2) identification of the sites/tissues of digestive tract where the αS aggregates are primarily formed 3) analysis of the pregression of these aggregates in tissues of the digestive tract Scientific and Technological Excellence: The submitted project meets the highest scientific standards and uses exclusively scientific methods. This is supported by the use of "start-of-the-art" innovative technology, including Multiphoton/confocal imaging system based on Zeiss LSM 880 NLO microscope (Aims 1, 2 and 3) with spectral GaAsP 32 detectors, 3 NDD GaAsP detectors and multiphoton laser Coherent Chameleon ULTRA II (680 - 1080 nm, 3.5W) combined with Chameleon Compact OPO (1000 to 1600 nm) and FLIM detector mounted on fixed stage upright Zeiss Axio Examiner electrophysiology microscope of course, accompanied by relevant allied software. Our laboratories belong to BioMed Martin (Biomedical center Martin), Xxxxxxxxx school of medicine Martin (JLF), Comenius University, Bratislava is a part of three EU funded centers: Biomedical Center, Center of Excellence for research in personalized therapy (CEVYPET) and Center of Excellence for experimental and clinical respirology (CEKR). In addition, the is a member of the leading scientific team "Cardiorespiratory System and Visceral Pain (CAREVIP)".
F	Inovatívnosť projektu	Cieľom projektu je zavedenie novej metódy na detekciu skorých štádií parkinsonovej choroby v tkanivách tráviaceho traktu založenej na fluorescenčnej mikroskopickej analýze zmeny životnosti fluorescencie (endogénnych, alebo exogénnych fluoroforov). Keďže ide o veľmi novú metódu, štandardne používanú a optimalizovanú na rekombinantných systémoch alebo bunkových líniách, túto metodiku budeme zavádzať a optimalizovať na myšacom modeli.

		V prípade úspešnosti, by sme v budúcnosti chceli celú metodiku posunúť na vyššiu úroveň. V spolupráci s gastroenterologickou a neurologickou klinikou, by sme chceli analyzovať vzorky biopsií (napr. čreva) u pacientov s PCH. Nové, rýchle a neinvazívne postupy zamerané hlavne na skorú diagnostiku ochorenia, by mohli mať pozitívny dopad na spomalenie ochorenia, liečbu alebo prípadne úplné zastavenie progresie ochorenia.
	The Project Innovation	The aim of the project is to introduce a new method for detecting the early stages of PD in digestive tract tissues based on microscopic analysis of the fluorescence lifetime changes (endogenous or exogenous fluorophores). Because it is a very new methodology commonly used and optimized on recombinant systems or cell lines, we will introduce and optimize this methodology on the mouse model. In the event of success, we would like to move the methodology to a higher level in the future, in collaboration with the clinics of gastroenterology and neurology we would like to analyze samples of biopsies (eg, the intestines) from patients with PD. New, fast and non-invasive procedures, mainly focused on the early diagnosis of the disease, could have a positive impact on the slowing of the disease, the treatment or eventually the complete cessation of disease progression.
G	Pracovné činnosti (aktivity a časový harmonogram)	K navrhovaniu časového harmonogramu jednotlivých experimentov sme pristupovali starostlivo a pozorne. Pri riešení projektu sme si stanovili nasledujúce ciele a príslušný harmonogram: 11/18-06/19 (1) Optimalizácia detekcie agregátov αS pomocou multifotónovej konfokálnej mikroskopie a FLIM (stanovenie životnosti fluorescencie) analýzy v živých neuronálnych bunkách. 04/19-09/19 (2) Analýza tvorby agregátov αS a ich ko-lokalizácie s jednotlivými bunkovými štruktúrami v neuronálnych bunkových líniách 11/18-12/19 (3) Stanovenie časového priebehu šírenia patologických zmien (agregácia αS) v jednotlivých morfologicko-anatomických štruktúrach PNS a CNS v myšacom modeli patogenézy Parkinsonovej choroby v PNS, založenom na orálnej aplikácii rotenónu. 05/19-12/20 (4) Možnosti diagnostiky skorých štádií ochorenia - detekcia agregátov αS vo vitálnych tkanivách/biopsiách v periférnych a centrálnych anatomických štruktúrach v myšacom modeli patogenézy PCH v PNS pomocou FLIM analýzy. Vzhľadom k tomu, že v cieľoch 1,2 sa zaoberáme detekciou agregátov αS (1) a ich ko-lokalizácie s jednotlivými bunkovými štruktúrami v neuronálnych bunkových líniách (2), tieto experiemnty budú realizované v následnej postupnosti. Metodiky, ktoré budeme používať pri riešení tychto otázok: zobrazovacie metódy – konfokálna multifotónová mikroskopia, FLIM mikroskopia a analýza; imunocytologické metódy - detekcia αS agregátov pomocou imunofarbenia s využitím protilátok rozpoznávajúcich αS, ko-lokalizácia αS s bunkovými organelami s použitím špecifických protílátok; farbenie živých buniek - detekcia αS agregátov v živých bunkách pomocou ThS, využitie organelovo – špecifických fluorescenčných markerov; biochemické metódy – western blot, charakterizácia αS agregátov v bunkách pomocou štiepenia ProteínázouK (štiepi monomérne proteíny, nie agregované); bunková frakcionácia a následna western blot analýza na identifikáciu bunkových organel s prítomnými αS agregátmi. Keďže hlavným cieľom projektu, je zavedenie metodiky na detekciu agregátov αS v myšacom modeli, budeme od samého začiatku

		riešenia projektu pracovať aj na zavedení myšacieho modelu
		a stanovení časového priebehu šírenia patologických zmien
		(agregácia αS) v jednotlivých morfologicko-anatomických
		štruktúrach PNS a CNS (3). Rovnako si uvedomujeme, že
		realizácia tohto cieľa je časovo náročná, preto sme si vyčlenili
		dostatočný priestor na jeho splnenie. Metodiky, ktoré budeme
		používať pri riešení tychto otázok: myšací model PD – myš domáca
		(BL6), orálna aplikácia rotenónu pomocou sondy; behaviorálne testy
		– na stanovenie progresie ochorenia a postihnutia motorických
		funkcií; histologická analýza; biochemické metódy – doplňujúce, na
		potvrdenie patolģie.
		V polovici roku 2019, po detailnej charakterizácii myšacieho modelu
		a stanovení časového priebehu šírenia patológie, plánujeme začať
		so samotnou detekciou agregátov αS vo vitálnych
		tkanivách/biopsiách v periférnych a centrálnych anatomických
		štruktúrach v myšacom modeli patogenézy PCH v PNS
		pomocou FLIM analýzy (4). Metodiky, ktoré budeme používať pri
		riešení tychto otázok: zobrazovacie metódy – konfokálna
		multifotónová mikroskopia a FLIM mikroskopia a analýza
		wholemount“ tkanív tráviaceho traktu s využitím endogénných
		a exogénnych flurofórov; biochemické metódy – doplňujúce, na
		potvrdenie patológie.
		We have paid meticulous attention to designing the timeline of the
		experiments. We set the following objectives and schedule:
		11/18-06/19 (1) Optimization of αS aggregation detection by multi-
		photon confocal microscopy and FLIM (fluorescence lifetime
		imaging) analysis in living neuronal cells.
		04/19-09/19 (2) Analysis of αS aggregates formation and their
		colocalization with cellular structures in neuronal cell lines
		11/18-12/19 (3) The time course analysis of pathology spread
		(aggregation of αS) in in peripheral and central tissues in mouse
		model of Parkinson's disease based oon oral administration of
		rotenone.
		05/19-12/20 (4) Diagnostics of early stages of disease - Detection of
		αS aggregates in vital tissues / biopsies in peripheral and central
		tissues in mouse model of PD pathogenesis in PNS, using FLIM
		analysis.
		Since objectives 1 and 2 are focused on detection of αS (1)
		aggregates and their co-localization with individual cellular
	Work Activities (activities and time schedule)	structures in neuronal cell lines (2), these experiments will be performed in a sequential order. Methods we will use to address these issues: imaging methods - confocal multiphoton microscopy,
		FLIM microscopy and analysis; immunocytological methods -
		detection of αS aggregates by immune staining using antibodies
		using αS, co-localization of αS with cellular organelles using specific
		antibodies; staining of living cells - detection of αS aggregates in
		living cells by ThS, use of organelle - specific fluorescent markers;
		biochemical methods - western blot, characterization of αS
		aggregates in cells by Proteinase cleavage (cleaves monomeric
		proteins, not aggregated); cell fractionation and subsequent Western
		blot analysis to identify organelles with the presence of aggregated
		αS.
		Since the main objective of the project is to introduce the
		methodology for the detection of αS aggregates in the mouse model,
		we will work from the very beginning of the project on mouse model
		development and determination of the time course of the
		pathological changes propagation (αS aggregation) in individual
		morphological and anatomical structures PNS and CNS (3). We
		are also aware that the realization of this goal is time consuming, so

		we have given enough space to meet it. Methods we will use to address these issues: the mouse model of PD - mouse (BL6), the oral application of rotenone; behavioral tests - to determine progression of disease and the motor functions impairment; histological analysis; biochemical methods - supplementary, for confirmation of pathology progression. Approximately in mid-2019, following the detailed characterization of the mouse model and the determination of the time course of pathology spreading, we plan to start with the detection of αS aggregates in vital tissues/biopsies in peripheral and central anatomical structures in the mouse model of PCH pathogenesis in PNS using FLIM analysis (4). Methods we will use to address these issues: imaging methods - confocal multiphoton microscopy and FLIM microscopy and wholemount analysis of digestive tract tissues using endogenous and exogenous flurofors; biochemical methods - supplementary, to confirm pathology.
H	Výsledky projektu	V rámci riešenia predloženého projektu sa plánujeme zaoberať optimalizáciou FLIM analýzy exogénnych ako aj endogénnych fluorofórov v animálnom modeli PCH. Pozorovaním zmien dĺžky vyhasínania fluorescencie týchto molekúl si dávame za ciel vývoj senzitívnej a špecifickej metódy pre zachytenie iniciácie tvorby αS agregátov a progresie ich hromadenia. Očakávané výsledky by sme zrhnuli v nasledujúcich bodoch: 1. V prípade NADH počítame s potvrdením zmien životnosti fluorescencie NADH po iniciácii αS agregácie v bunkových a animálnych modeloch PCH. 2. Pomocou analýzy ko-lokalizácie NADH s αS agegátmi očakávame informácie o priamom naviazaní molekúl NADH na αS agregáty alebo v opačnom prípade potvrdenie paralelnosti týchto dvoch procesov popr. ich možnej kombinácie. 3. Po ukončení analýz s ThS očakávame posilnenie vyššie popísaných zistení, hlavne po ko-lokalizácii s NADH signálom a agregátmi αS. 4. FLIM analýza ThS by mala okrem iného priniesť metodologicky a diagnosticky využiteľné informácie o zmenách životnosti fluorescencie tohto markera agregácie. Očakávame, že prípadné zmeny v životnosti ThS budú odstupňované podobne ako je to v prípade NADH v rôznych štádiách rozvoja zmien súvisiacich s patogenézou podobnou PCH.
	Project Results	In the framework of the present project we plan to focus on optimization of FLIM analysis of both exogenous and endogenous fluorophores in the animal model of PD. By observing the changes in fluorescence lifetimes of these molecules, we aim to develop a sensitive and specific method for capturing the initiation of intracellular αS aggregation and the further pregression of its accumulation. We expected the results to be broken in the following points: 1. In the case of NADH, we expect to confirm its fluorescence lifetime changes after initiation of αS aggregation in cellular and animal models of PD. 2. By analyzing the co-localization of NADH with αS aggregates, we expect information on the direct binding of NADH molecules to αS aggregates, or otherwise confirm the parallelism of these two processes, respectively their possible combination. 3. Upon completion of ThS analyzes, we expect to strengthen the above-described findings, especially after co-localization with NADH signal and αS aggregates. 4. ThS FLIM analysis should, among other things, provide methodologically and diagnostically useful information on changes in

		fluorescence lifetime of this aggregation marker. We expect that any changes in ThS fluorescence lifetime will be graduated similarly to NADH at various stages of development of changes associated with PCH-like pathogenesis.
I	Prínosy projektu	Hlavným prínosom predkladaného projektu, je hlavne v potrebe vývoja jednoduchšej diagnostickej metódy PCH a hlavne v možnosti odhalenia skorých štádií ochorenia. Výsledky získané s využitím fluorescenčnej próby ThS pre in vivo monitoring prebiehajúcich zmien, môžu predstavovať platformu pre návrh skríningovej metodiky schopnej odhalenia tak závažného ochorenia akým je PCH, popr. iné neurodegeneratívne poruchy. Druhým prínosom je prehĺbenie poznatkov o úlohe NADH pri procese vzniku vnútrobunkových agregátov pomôže detailnejšie pochopiť mechanizmus progresie PCH ako aj ďalších neurodegeneratívnych ochorení. Je tak možné získať prehľad o vnútrobunkovej postupnosti rozvoja zmien súvisiach s PCH, čím sa otvára možnosť identifikácie ich relevantnosti z hľadiska reverzibility spôsobeného poškodenia.
	Project Benefits	The main benefit of the presented project is mainly the need to develop a simpler diagnostic method of PD and especially the possibility of detection of early stages of the disease. The results obtained using the ThS fluorescence probe for in vivo monitoring of ongoing changes may be a platform for a proposal for a screening methodology capable of detecting a serious disease such as PD, other neurodegenerative disorders. The second contribution is to deepen the knowledge of the role of NADH in the process of formation of intracellular aggregates, to help understand in more the mechanism of PD pregression as well as other neurodegenerative diseases. Thus, it is possible to obtain an overview of the intracellular sequence of the pathological changes development associated with PCH, thus opening up the possibility of identifying their relevance in terms of reversibility of the damage caused.
J	Iné realizované projekty v danej oblasti	VEGA 1/0334/18, zodpovený riešiteľ: MP; zástupca/spoluriešiteľ: AKT, Analýza časovej závislosti patogenézy Parkinsonovej choroby v periférnom a centrálnom nervovom systéme. Rozpočet: 13 027,00Eur/rok; realizácia: 2018-2020. Začiatok tohto projektu sa datuje k aktuálnemu roku, preto v tomto prípade nemáme ešte releventné výsledky. Cieľom tohto projektu je zavedenie myšieho modelu PCH, s patológiou začínajúcou v tkanivách tráviaceho traktu a pokračujúcou do CNS. Tento fenotyp budeme indukovať orálnou alebo subkutánnou aplikáciou Rotenónu. Hlavným zámerom predkladaného projektu je získanie doplňujúcich, avšak kľúčových informácií o priebehu patogenézy PD z časového a anatomického pohľadu u rotenónom indukovanom myšacom modeli ochorenia. Pridanou hodnotou projektu je neštandardný uhol pohľadu zameraný na periférny nervový systém. Grant UK/17/2017: zodpovedný riešiteľ: MP, Optimalizácia mikroskopickej metódy FLIM pre štúdium skorých faktorov podieľajúcich sa na patogenéze Parkinsonovej choroby v bunkovom modeli. Rozpočet: 1 000,00Eur; Realizácia: 2017. Téma, ktorou sme sa rozhodli v rámci nášho projektu zaoberať nebola doposiaľ na našom pracovisku riešená. Cieľom projektu bolo zaviesť a optimalizovať FLIM (fluorescence lifetime imaging) metódu pre štúdium skorých zmien podieľajúcich sa na patogenéze PCH. Pri tejto pilotnej štúdii sme sa sústredili na jednochý model, a to neuronálnu bunkovú líniu SH-SY5Y. Parkinsonický fenotyp (agregáciu αS) sme indukovali pomocou Rotenónu. Používali sme

		veľmi nízke koncentrácie Rotenónu (5-100nM). Zistili sme, že pri koncentrácii 10nM/24h dochádza k postupnej tvorbe agregátov αS, avšak táto koncentráia ešte nie je toxická pre bunku. Prítomnosť agregátov αS, sme detegovali štandardnými metódami i) imunocytochemické farbenie pomocou protilátok proti αS ii) farbením živých buniek fluorescenčnou permeabilnou próbou ThS. Tieto skutočnosti sme korelovali so zmenou životnosti fluorescencie endogénneho NADH. Zistili sme že i) vplyvom Rotenónu, dochádza k predĺženiu životnosti NADH, pričom tento signál sme detegovali v blízkosti mitochondriálnej siete, ii) aj v prípade farbenia živých buniek ThS, dochádza k zmene životnosti ThS v závislosti od stúpajúcej koncentrácie Rotenónu a výskytu agregátov αS. APV-15-0163: zodpovedný riešiteľ: AKT; spoluriešiteľ: MP, Analýza nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť pomocou optogenetických metód a multifotónovej mikroskopie. Rozpočet: 74 300,00Eur; Realizácia: 2016-2019. V tomto projekte sme sa zamerali na molekulárne zmeny nervových zakončení sprostredkujúcich vnútornú bolesť. cZistili sme, že i) nociceptory embryonicky odvodené z neurálnej lišty sú zakončené v mukóze, a primárne exprimujú receptory pre snímanie noxických stimulov v lumene, ii) nociceptory odvodené z plakód, inervujú hlbšie vrstvy, (submukóza a cirkulárny sval) a snímajú prostredia vnútorného tkaniva iii) nociceptory odvodené z neurálnej lišty sa rozvetvujú do myenterického plexu kde modulujú funkciu myenterických neurónov. VEGA 1/0067/14: spoluriešiteľ: AKT, MP, Mechanizmy neurogénnej dysfunkcie dolných močových ciest - základné a klinické štúdie. Realizácia: 2014-2017.
	Other Projects implemented in this area	VEGA 1/0334/18: principal investigator: MP; representative of principal investigator/co-investigator: AKT, Time correlation of Parkinson´s disease pathogenesis in peripheral and central nervous system. Budget: 13 027,00Eur/year; Realization: 2018-2020. The start of this project dates back to the current year, so we do not have any relevant results yet. The aim of this project is to introduce a mouse model of PD, with a pathology starting in the tissues of the digestive tract and progressing to the CNS. This phenotype will be induced by oral or subcutaneous administration of Xxxxxxxx. The main aim of the presented project is to obtain supplementary but crucial information on PD pathogenesis in terms of time course and anatomy in rotenone-induced mouse model of the disease. Grant UK/17/2017: principal investigator: Optimization of the FLIM microscopic method for the study of early factors involved in the pathogenesis of Parkinson's disease in the cell model. Budget: 1 000,00Eur; Realization: 2017. The topic we have chosen to address in our project has not yet been addressed at our department. The goal of the project was to introduce and optimize the FLIM (fluorescence lifetime imaging) method for investigation of early changes involved in the pathogenesis of PD. In this pilot study, we focused on a simple model, the neural cell line SH-SY5Y. Parkinsonian phenotype (aggregation of αS) was induced by Xxxxxxxx. We used very low Rotenone concentrations (5-100nM). We found that at a concentration of 10nM / 24h, the αS aggregates were sequentially generated, but this concentration was not yet toxic to the cell. The presence of αS aggregates, we have detected by standard methods i) immunocytochemical staining using anti- αS antibodies; ii) staining of living cells with ThS, a fluorescent permeable probe. This findings we have correlated with a change in endogenous NADH

		fluorescence lifetime. We found that i) due to Rotenone treatment, the NADH fluorescence lifetime of is prolonged, while detecting this signal near the mitochondrial network, ii) depending on the Rotenone concentration and the occurrence of αS aggregates. APV-15-0163: principal investigator: AKT; co-investigator: MP, Analysis of nerve terminals mediating visceral pain by optogenetic strategies and multiphoton imaging. Budget: 74 300,00Eur; Realization: 2016-2019. In this project, we focused on molecular changes of nerve terminals mediating the visceral pain. We have found that i) nociceptors embryonically derived from neural crest terminate in the mucosa and primarily express receptors for sensing noxious stimuli in the lumen, ii) nociceptors derived from placodes innervate deeper layers (submucosa and circular muscle) and sense inner tissue environment iii) neural crest-derived nociceptors also branch into myenteric plexus modulating the function of intrinsic myenteric neurons. VEGA 1/0067/14: co-investigator: AKT, MP, Mechanisms of neurogenic dysfunction of the lower urinary tract - basic and clinical studies. Realization: 2014-2017.
K	Analýza rizík	Oblasťou predstavujúcou určitú formu rizika v rámci predkladaného projektu je vzhľadom na charakter projektu zavedenie spoľahlivého a detailne definovaného animálneho modelu pre podmienky nášho laboratória. Na minimalizácii tohto rizika v súčasnosti už pracujeme na zavedení rotenónom indukovaného animálneho modelu PCH v rámci riešenia financovaného projektu VEGA 1/0334/18. Alternatívnym riešením v prípade vzniku komplikácii s uskutočnením animálnych experimentov bude využitie komerčne dostupných imortalizovaných resp. primárnych bunkových kultúr z rôznym pôvodom. Skúsenosti s FLIM mikroskopickým zobrazovaním a analýzou predstavuje rovnako oblasť možného rizika. V tejto súvislosti, v našom laboratóriu existuje experimentálna skúsenosť, získali sme predbežné výsledky ako v prípade NADH, tak aj po farbení ThS a ďalšími fluorescenčnými próbami, či už živých alebo fixovaných bunkových preparátov. Členovia tímu sa každoročne zúčastňujú školení vedených expertmi v danej oblasti. V minulom roku bola okrem iného na tému optimalizácie FLIM analýzy životnosti fluorescencie NADH v živých bunkách udelená finančná podpora Univerzity Komenského vo grantu 17/2017. Konfokálne mikroskopické zobrazovanie celých tkanív tráviaceho traktu v animálnych modeloch je ďalej nosnou témou projektu APVV- 15-0163. Skúsenosti získané pri riešení tohto projektu nám veľmi pomožu hlavne pri imunohistologickom farbení tkanív tráviaceho traktu a snímania celých tkanív (v 3D) pomocou konfokálneho multifotónového mikroskopu. Dôkaz prítomnosti agregátov αS S, kolokalizácia so špecifickými subcelulárnymi štruktúrami, bude okrem mikroskopických metód potvrdený aj doplňujúcimi biochemickými metódami. Pre dôkaz väzby NADH s agregátmi je možné použiť obdobnú in vitro analýzu. Tieto alternatívne metodické prístupy je možné využiť aj ako posilnenie mikroskopických pozorovaní a pre tento cieľ je s nimi v rámci projektu plánované uskutočnenie laboratórnych analýz.
	Risk Analysis	The first area that represents a certain form of risk is due to the nature of the project, the introduction of a reliable and in detail characterized animal model. To minimize this risk, we are already working on the development of the rotenone-induced animal model of PD within the framework of the VEGA 1/0334/18 project. An alternative solution, in the event of a complication with carrying out

		animal experiments, will be the use of commercially available immortalized and / primary cell cultures of different origins. Experience with FLIM microscopic imaging and analysis also represents the area of potential risk. In this regard, there is an experimental experience in our laboratory, we acquired preliminary results, both for NADH and for staining with ThS and other fluorescence probes in living or fixed cell samples. Team members take part in yearly training by experts in the field. Last year, financial support from the University of Comenius in grant 17/2017 was awarded on the topic of optimization of FLIM analysis of the lifetime of NADH fluorescence in living cells. The confocal microscopic imaging of whole tissues of the digestive tract in animal models is also a key theme of the APVV-15-0163 project. The experience gained in solving this project will greatly help us mainly in immunohistological digestion of digestive tract tissues and whole tissue scanning (in 3D) using a confocal multiphoton microscope. Confirmation of the presence of αS aggregates, collocation with specific subcellular structures, will be confirmed by complementary biochemical methods in addition to microscopic methods. A similar in vitro analysis can be used to demonstrate the binding of NADH to aggregates. These alternative methodical approaches can also be used to enhance microscopic observations and, for this purpose, laboratory analyzes are planned within the project.
L	Predpoklad vzniku patentov a stanovisko k otázke duševného vlastníctva	Keďže ide o úplne novú problematiku, optimalizáciu a zavedenie novej metódy na diagnostiku proteínových agregátov v orgánoch tráviaceho traktu, v tejto fáze nepredpokladáme, že projekt bude generovať zisk. V prípade úspechu, samozrejme existuje možnosť posunúť projekt na vyššiu úroveň, kedy by táto metodika mohla byť patentovaná.
	If patent protection foreseen? Your statement on the issue of intellectual property.	As this is an entirely new issue, optimizing and introducing a new method for diagnosing protein aggregates in digestive tract organs, at this stage we do not expect the project to generate profits. In the case of success, of course there is the possibility of moving the project to a higher level when this methodology could be patented.
M	Informovanosť	Výsledky s deklarovanou štatistickou významnosťou budú získané relevantnou štatistickou analýzou získaných dát. Tieto dáta plánujeme získať panelom mikroskopických, biochemických a molekulárno-biologických metodických prístupov aplikovaných na medzinárodne etablované animálne a bunkové modeli PCH. Výsledky plánujeme zverejniť publikovaním min. 2 vedeckých monografií v medzinárodných odborných časopisoch identifiko- vaných v databáze current content prípadne s minimálnym impakt faktorom IF>3. So získanými výsledkami sa plánujeme zúčastniť konferencie 14th International Conference on AD/PD 2019, alternatívne na inom relevantnom medzinárodnom fóre.
	Awareness	The results with declared statistical significance will be acquired by relevant statistical analysis of the data obtained. We plan to acquire these data through a panel of microscopic, biochemical and molecular-biological methodological approaches applied to the internationally validated animal and cellular models of PCH. We plan to publish min. 2 scientific monographs in international scientific journals identified in the current content database or with a minimum impact factor IF> 3. With the results obtained, we are planning to attend the 14th International Conference on AD / PD 2019, alternatively at another relevant international forum.

VV-2018-R-EK	V prípade potreby efektívna spolupráca s Etickou komisiou
	When necessary the effective cooperation with Ethics Committee
Slovenská verzia / Slovak version:	Projekt bude v prípade schválenia a pred samotnou realizáciou predložený na schválenie Etickej komisii JLF UK. Relevantný doklad o schválení bude následne predložený ako súčasť 1. priebežnej správy projektu.
Anglická verzia / English version:	In case of project approval, it will be also submitted for the approval to the Ethic Committee JLF UK prior to its elaboration. The relevant approval document will be then submitted as a part of a first project report.

Celkový a podrobný rozpočet projektu na 3 roky / Overall and detailed project budget for 3 years

Príloha č. 3. 2.

Annex Nr. 3. 2.

Identifikačné číslo projektu / Poject ID	2018/10-UKMT-6	Žiadateľ / Applicant	Univerzita Komenského v Bratislave Jesseniova lekárska fakulta v Martine/Comenius University in Bratislava Xxxxxxxxx Faculty of Medicine in Xxxxxx
Xxxxx projektu / Project title	Detekcia skorých štádií Parkinsonovej choroby pomocou fluorescenčnej multifotónovej mikroskopie a FLIM analýzy / Detection of early stages of Parkinson's disease by fluorescence multiphoton microscopy and FLIM analysis	Zodpovedný riešiteľ / Principal investigator
Akronym projektu / Acronym of the project	PADIFLIM	Sledované obdobie / The observation period	2018 - 2020

Pri vypĺňaní rozpočtu prosím postupujte VÝHRADNE podľa Príručky pre žiadateľa !

Položky ekonomickej klasifikácie, ktoré tabuľka rozpočtu nezahŕňa a sú pre financovanie Vášho projektu nevyhnutné môžete doplnií, prípadne tie, ktoré nie sú potrebné pre financovanie projektu môžete odstránií.

		2018				2019				2020
			z toho / of this:				z toho / of this:				z toho / of this:
Ekonomická klasifikácia rozpočtovej klasifikácie / Economic classification of the budget classification	Položka / Item	Výdavky celkom / Total costs	Výdavky zo štátneho rozpočtu / Expenditure for the state budget (up to 70%)	Vlastné zdroje / Own resources (at least 30%)	Špecifikácia položky / Item specification	Výdavky celkom / Total costs	Výdavky zo štátneho rozpočtu / Expenditure for the state budget (up to 70%)	Vlastné zdroje / Own resources (at least 30%)	Špecifikácia položky / Item specification	Výdavky celkom / Total costs	Výdavky zo štátneho rozpočtu / Expenditure for the state budget (up to 70%)	Vlastné zdroje / Own resources (at least 30%)	Špecifikácia položky / Item specification
600	Bežné výdavky / Current expenditure
610 000	Mzdy / Payroll	3 000,00 €	0,00 €	3 000,00 €	Ide o mzdy riešiteľov projektu, ktorý sú uvedený vo formulári 3-1A projektový formulár v časti Zoznam riešiteľov. Kalkulácia miezd bola vyčíslená na základe stanovenia počtu hodín, ktoré jednotlivý riešitelia budú participovať na projekte. / These are the salaries of the project investigators, which are listed in the Form 3-1A project form in the List of staff directly involved in the Project. Payroll calculation was calculated by determining the number of hours the individual investigators will participate in the project.	16 901,31 €	0,00 €	16 901,31 €	Ide o mzdy riešiteľov projektu, ktorý sú uvedený vo formulári 3-1A projektový formulár v časti Zoznam riešiteľov. Kalkulácia miezd bola vyčíslená na základe stanovenia počtu hodín, ktoré jednotlivý riešitelia budú participovať na projekte. / These are the salaries of the project investigators, which are listed in the Form 3-1A project form in the List of staff directly involved in the Project. Payroll calculation was calculated by determining the number of hours the individual investigators will participate in the project.	16 903,00 €	0,00 €	16 903,00 €	Ide o mzdy riešiteľov projektu, ktorý sú uvedený vo formulári 3-1A projektový formulár v časti Zoznam riešiteľov. Kalkulácia miezd bola vyčíslená na základe stanovenia počtu hodín, ktoré jednotlivý riešitelia budú participovať na projekte. / These are the salaries of the project investigators, which are listed in the Form 3-1A project form in the List of staff directly involved in the Project. Payroll calculation was calculated by determining the number of hours the individual investigators will participate in the project.
620 000	Povinné odvody / Statutory deductions	1 056,00 €	0,00 €	1 056,00 €	Ide o odvody za zamestnávateľa k položke mzdy. / This is the employer's payroll fee.	5 949,26 €	0,00 €	5 949,26 €	Ide o odvody za zamestnávateľa k položke mzdy. / This is the employer's payroll fee.	5 949,26 €	0,00 €	5 949,26 €	Ide o odvody za zamestnávateľa k položke mzdy. / This is the employer's payroll fee.
	Osobné výdavky spolu / Personnel expenses	4 056,00 €	0,00 €	4 056,00 €		22 850,57 €	0,00 €	22 850,57 €		22 852,26 €	0,00 €	22 852,26 €
631	Cestovné náhrady / Travel expenses
631 001	Cestovné náhrady tuzemské / Travel expenses domestic	0,00 €	0,00 €	0,00 €		500,00 €	500,00 €	0,00 €	domáce kongresy / Slovak conferences	500,00 €	500,00 €	0,00 €	domáce kongresy / Slovak conferences
631 002	Cestovné náhrady zahraničné / Travel expenses abroad	0,00 €	0,00 €	0,00 €		3 500,00 €	3 500,00 €	0,00 €	zahraničné kongresy (4 členovia tímu, AD/PD - Lisabon) / Foreign conferences (4 team members, AD/PD - Lisbon)	3 000,00 €	3 000,00 €	0,00 €	zahraničné kongresy (3 členovia tímu, FENS - Glagow) / Foreign conferences (3 členovia tímu, FENS - Glagow)
632	Energie, voda a telekomunikácie / Energy, Water and Telecommunications
632 001	Energie / Energy	200,00 €	200,00 €	0,00 €	režijné náklady / overheads	1 000,00 €	1 000,00 €	0,00 €	režijné náklady / overheads	1 000,00 €	1 000,00 €	0,00 €	režijné náklady / overheads
633	Materiál / Material
633 002	Výpočtová technika / Information technology	3 000,00 €	3 000,00 €	0,00 €	2 x PC set / 2 x PC set	0,00 €	0,00 €	0,00 €		0,00 €	0,00 €	0,00 €
633 004	Prevádzkové stroje a zariadenia / Operating machines and equipment	2 000,00 €	2 000,00 €	0,00 €	Ide o výdavok na pH meter a automatizované počítadlo buniek / This is a cost of PH meter meter and an automated cell counter	0,00 €	0,00 €	0,00 €		1 500,00 €	1 500,00 €	0,00 €	trepačka na farbenie preparátov/ shaker for staining of samples

633 006	Všeobecný materiál / General material	4 000,00 €	4 000,00 €	0,00 €	spotrebný laboratórny materiál, sondy na per-orálnu aplikáciu rotenónu u myší, nákup stl. plynov, kul. médiá, protilátky, fluorescenčné próby, chemikálie na histologickú, imunocytochmickú a biochemickú analýzu / consumable laboratory material, probes for peroral application of rotenone in mice, purchase of gases, cell cultures media, antibodies, fluorescence probes, chemicals for histological, immunocytochemical and biochemical analysis	22 000,00 €	22 000,00 €	0,00 €	spotrebný laboratórny materiál, sondy na per-orálnu aplikáciu rotenónu u myší, nákup stl. plynov, kul. médiá, protilátky, fluorescenčné próby, chemikálie na histologickú, imunocytochmickú a biochemickú analýzu / consumable laboratory material, probes for peroral application of rotenone in mice, purchase of gases, cell cultures media, antibodies, fluorescence probes, chemicals for histological, immunocytochemical and biochemical analysis	22 300,00 €	22 300,00 €	0,00 €	spotrebný laboratórny materiál, sondy na per- orálnu aplikáciu rotenónu u myší, nákup stl. plynov, kul. médiá, protilátky, fluorescenčné próby, chemikálie na histologickú, imunocytochmickú a biochemickú analýzu / consumable laboratory material, probes for peroral application of rotenone in mice, purchase of gases, cell cultures media, antibodies, fluorescence probes, chemicals for histological, immunocytochemical and biochemical analysis
633 013	Softvér / Software	0,00 €	0,00 €	0,00 €		2 500,00 €	2 500,00 €	0,00 €	modernizácia softvéru pre FLIM analýzu - licencia pre 3 užívateľov a softvér pre štatistickú analýzu - licencia pre 5 užívateľov / software upgrade for FLIM analysis - license for 3 users and software for statistical analysis - license for 5 users	0,00 €	0,00 €	0,00 €
635	Rutinná a štandardná údržba / Routine and standard control
635 004	Údržba prevádzkových strojov / Maintenance of operating machines	1 500,00 €	1 500,00 €	0,00 €	pravidelný servis lab. Prístrojov / regular service of lab. apparatus	2 000,00 €	2 000,00 €	0,00 €	pravidelný servis konfokálneko multifotónového mikroskopu, laserov, objektívov, pravidelný servis laminárneho boxu, servis lab. prístrojov, kalibrácia presnej laboratórnej techniky / regular service of confocal multi-photon microscope, lasers, lenses, regular service laminar box, service lab. apparatus, precision laboratory calibration	2 000,00 €	2 000,00 €	0,00 €	pravidelný servis konfokálneko multifotónového mikroskopu, laserov, objektívov, pravidelný servis laminárneho boxu, servis lab. prístrojov, kalibrácia presnej laboratórnej techniky / regular service of confocal multi-photon microscope, lasers, lenses, regular service laminar box, service lab. apparatus, precision laboratory calibration
637	Služby / Services
637 001	Školenia, semináre / Training, seminars	0,00 €	0,00 €	0,00 €		1 500,00 €	1 500,00 €	0,00 €	odborné školenia - ucast na workshopoch a skoleniach zameranych na FLIM analyzu - účastnícky poplatok/ professional training - participation in workshops and training focused on FLIM analysis - participation fee	1 500,00 €	1 500,00 €	0,00 €	odborné školenia - ucast na workshopoch a skoleniach zameranych na FLIM analyzu - účastnícky poplatok/ professional training - participation in workshops and training focused on FLIM analysis - participation fee
637 004	Všeobecné služby / Universal services	0,00 €	0,00 €	0,00 €		4 000,00 €	4 000,00 €	0,00 €	náklady spojené s publikáciou vedeckých monografii, korektúry manuskriptov, expertíza pri behoviorálnych testovaniach /costs associated with the publication of scientific monographs, manuscript corrections, behavioral testing	4 000,00 €	4 000,00 €	0,00 €	náklady spojené s publikáciou vedeckých monografii, korektúry manuskriptov, expertíza pri behoviorálnych testovaniach / costs associated with the publication of scientific monographs, manuscript corrections, behavioral testing
700	Kapitálové výdavky / Capital expenditures
713 004	Nákup prevádzkových strojov / Purchase of operating equipment	0,00 €	0,00 €	0,00 €		3 000,00 €	3 000,00 €	0,00 €	1set Ethovision na behavioralne testovanie zvierat / 1set Ethovision for behavioral tsting of animals	0,00 €	0,00 €	0,00 €
713 005	Nákup špeciálnych strojov a zariadení / Purchase of special machinery and equipment	19 000,00 €	19 000,00 €	0,00 €	Ide o výdavok na chladenú centrifúgu a kameru pre analýzu western blotových analýz / This is a cost of centrifuge with cooling system and camera for the western blot analysis	0,00 €	0,00 €	0,00 €		4 500,00 €	4 500,00 €	0,00 €	Laminárny box / laminar flow box
	Tovary a služby spolu / Total value of goods and services	29 700,00 €	29 700,00 €	0,00 €		40 000,00 €	40 000,00 €	0,00 €		40 300,00 €	40 300,00 €	0,00 €
	Výdavky celkom / Total expenditure	33 756,00 €	29 700,00 €	4 056,00 €		62 850,57 €	40 000,00 €	22 850,57 €		63 152,26 €	40 300,00 €	22 852,26 €

INFO:

Z celkových finančných nákladov poskytnutých poskytovateľom možno použiť na zabezpečenie služieb maximálne 20 %

Z dotácie poskytovateľa možno použiť na režijné náklady maximálne 7 % z celkových finančných nákladov poskytnutých poskytovateľom Objem kapitálových výdavkov nesmie prekročiť 30 % z celkových finančných nákladov poskytnutých poskytovateľom.